ENHANCING LC-MS/MS ANALYSIS OF B-GROUP VITAMINS WITH HYBRID SURFACE TECHNOLOGY

Význam tématu

Phosphátové deriváty B-vitamínů ve formě coenzymovaných forem hrají klíčovou roli v biologických procesech, avšak jejich analýza je komplikována interakcemi s kovovým povrchem tradičních HPLC systémů, což vede k špatným chromatografickým parametrům a nespolehlivým výsledkům.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na porovnání výkonu hybridní organicko-anorganické povrchové technologie MaxPeak HPS integrované do systému Waters ACQUITY Premier s konvenčními nerezovými komponentami při simultánní LC-MS/MS analýze 18 B-skupinových vitamínů ve vzorcích energetických nápojů a doplňků stravy.

Použitá metodika

Byly použity dvě téměř identické UPLC-MS/MS sestavy: jedna s MaxPeak HPS (HPS Setup) a druhá s nerezovými komponentami (SOP Setup). Chromatografie probíhala na sloupci BEH C18 1,7 μm, 2,1 × 100 mm s 9minutovým gradientem (20 mM ammonium formiátu pH 5 až methanol). Detekce byla prováděna na Xevo TQ-S micro v pozitivním ionizačním módu.

Použitá instrumentace

• UPLC systém: Waters ACQUITY Premier System
• MS systém: Xevo TQ-S micro
• Kolona: ACQUITY Premier BEH C18, 1,7 μm, 2,1 × 100 mm
• Vial: LCMS Certified Amber Glass Max Recovery Vial
• Teploty: zdroj 150 °C, odlučování 350 °C
• Mobilní fáze A: 20 mM NH₄ formiát (pH 5.0), B: methanol

Hlavní výsledky a diskuse

MaxPeak HPS významně zvýšila plochy chromatografických píků a zlepšila jejich symetrii zejména u fosfátových vitamínů (FMN, PLP), což vedlo až k dvojnásobnému nárůstu signálu. Systém s HPS rovněž eliminoval carry-over, který byl při použití konvenčních komponent na úrovni 0,03–0,1 % původního signálu.

Přínosy a praktické využití metody

• Vyšší citlivost a přesnost kvantifikace B-vitamínů
• Redukce tvorby špičkového ocasu a zlepšení reprodukovatelnosti
• Okamžitá eliminace carry-over bez dalších úprav metodiky

Budoucí trendy a možnosti využití

Hybridní povrchová technologie se může rozšířit na analýzu dalších polárních a fosfátových sloučenin, včetně metabolitů a peptidů. Očekává se rozvoj nových povrchových úprav a jejich integrace s miniaturizovanými a automatizovanými systémy pro vysokopropustnou analytiku.

Závěr

Hybridní MaxPeak HPS povrchy v LC-MS/MS systémech výrazně zlepšují efektivitu analýzy B-skupinových vitamínů díky zvýšené citlivosti, lepšímu tvaru píků a nulovému carry-over. Tato technologie přináší robustnější a spolehlivější výsledky v potravinářské a farmaceutické kvalitativní a kvantitativní analýze.

Reference

• Wakamatsu A.; Morimoto K.; Shimizu M.; Kudoh S. J. Sep. Sci. 2005, 28, 1823–1830
• Asakawa Y.; Tokida N.; Ozawa C.; Ishiba M.; Tagaya O.; Asakawa N. J. Chromatogr. A 2008, 1198, 80–86
• Lauber M.; Walter T. H.; DeLano M.; Gilar M.; Boissel C.; Smith K.; Birdsall R.; Rainville P.; Belanger J.; Wyndham K. Waters White Paper 2020, 720006930EN
• Birdsall R. E.; Kellet J.; Ippoliti S.; Ranbaduge N.; Shion H.; Yu Y. Q. Waters Application Notes 2020, 720007003EN
• Boissel C.; Walter T. H. Waters Application Notes 2020, 720007014EN
• Smith K. M.; Rainville P. Waters Application Notes 2020, 720006721EN
• Brennan K.; Lame M. L.; Donegan M.; Rainville P. D. Waters Application Notes 2020, 720007019EN