A rapid and simple LC-MS/MS method for the quantification of the EU regulated mycotoxins in cereal-based products

Význam tématu

Mykotoxiny v obilninách jsou pod přísným regulačním dohledem v EU. Rychlá a citlivá analýza je klíčová pro zajištění bezpečnosti potravin a splnění maximálních přípustných úrovní.

Cíle a přehled studie

• Validace kvantitativní LC-MS/MS metody pro simultánní stanovení 12 regulovaných mykotoxinů v moukách z obilovin.
• Zjednodušení přípravy vzorků a zkrácení celkové doby analýzy.
• Ověření výkonu metody na různých typech cereálních výrobků a v mezilaboratorním porovnání.

Použitá metodika

• Odvážení 5 g homogenizovaného vzorku.
• Extrakce 20 mL MeCN:H2O (80:20) s přídavkem 0,75 % acetic a 0,2 % formic acid, třepání 5 min a odstředění.
• Ředění supernatantu ředidlem (diluce 1:40) a přidání 10 µL interního standardu.
• Kaleribrace v roztoku s osmi body (bez blanku) v rozpětí relevantním pro MPL.
• Filtrace zakalených vzorků přes 0,2 µm skleněná vláknitá filtrační stříkačka.

Použitá instrumentace

• UPLC systém ACQUITY UPLC I-Class-FL.
• Hmotnostní spektrometr Xevo TQ-XS.
• Kolona BEH C18, 1,7 µm, 2,1 × 100 mm.
• Mobilní fáze: 1 mM octan amonný v H2O + 0,5 % acetic acid + 0,1 % formic acid; organická fáze MeOH + 0,5 % acetic acid + 0,1 % formic acid.
• Teplota kolony 40 °C, vzorku 15 °C, objem injekce 15 µL.

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearita regresních křivek: R2 mezi 0,9941 a 1,0000, rezidua < 20 %.
• LOQ určena jako nejnižší kalibrační bod; LOD/LOQ ověřeny podle pokynů Eurachem.
• Recoveries 90–115 % a intradenní RSD < 10 % pro tři úrovně obohacení.
• Matrix efekty od tlumení signálu > 30 % (nivalenol) až po zesílení > 1000 % (ochratoxin A), což potvrzuje nutnost interních standardů.
• Mezilaboratorní studie ve čtyřech laboratořích prokázala trueness 85–113 %, opakovatelnost 3,0–13 % a reprodukovatelnost 3,1–23 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Zjednodušená příprava vzorku a kratší analýza díky vysoké citlivosti Xevo TQ-XS.
• Využití 13C-značených interních standardů pro kompenzaci matrix efektů a ztrát při extrakci.
• Univerzální aplikace pro různé cereální matrice v QA/QC i výzkumu.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody o další mykotoxiny, metabolity a biotoxiny.
• Automatizované a robotizované postupy přípravy vzorků a online čištění.
• Použití nových kolónových materiálů a pokročilého softwaru pro data mining.
• Implementace metody pro on-line monitorování kvality potravin v reálném čase.

Závěr

Metoda splňuje požadavky EC 401/2006 a SANTE, nabízí vynikající citlivost, přesnost i robustnost a je vhodná pro rutinní i výzkumné účely.

Reference

• EU nařízení č. 1881/2006.
• B. Magnusson, U. Ornemark, Eurachem Guide (2. vydání, 2014).