Utilization of the Arc Premier System and XSelect Premier Columns for Sensitive LC-MS Quantitation of the Steroid Phosphates, Betamethasone, Dexamethasone, and Hydrocortisone

Význam tématu

Analýza steroidních fosfátů, jako jsou dexamethason, betamethason a hydrokortison, je zásadní pro farmaceutický výzkum, vývoj a kontrolu kvality. Metalofobní interakce těchto sloučenin s kovovými povrchy LC systému často vedou ke ztrátě analytické přesnosti, špatnému tvaru píků a omezené reprodukovatelnosti. Vyřešení tohoto problému umožňuje citlivou a spolehlivou kvantifikaci při nízkých koncentracích.

Cíle a přehled studie / článku

Studie se zaměřuje na porovnání standardního LC-MS systému s novou konfigurací Arc Premier System a XSelect Premier HSS T3 kolonou, obě vybavené technologií MaxPeak High Performance Surfaces (HPS). Hlavním cílem je prokázat zlepšenou chromatografickou výkonnost, vyšší návratnost analytů a zvýšenou citlivost pro steroidní fosfáty bez nutnosti opakované pasivace systému.

Použitá metodika a instrumentace

Pro chromatografii byla použita kolona XSelect Premier HSS T3 (2,5 µm, 2,1 × 100 mm) při 35 °C a mobilní fáze A (voda + 0,1 % kyseliny mravenčí) a B (acetonitril + 0,1 % kyseliny mravenčí). Gradientní eluce probíhala z 85 % A na 40 % A za 4,5 min, následoval flush při 5 % A a návrat do počátečních podmínek v čase 5,5 min. Celkový čas analýzy byl 6,5 min. Detekce a kvantifikace probíhala na triplekvadrupólovém spektrometru Xevo TQ-S micro.

Hlavní výsledky a diskuse

Porovnání standardního systému a Premier konfigurace odhalilo zásadní rozdíly:

• Premier systém detekoval všechny analyty již od třetí injekce (5 µL, 10 ng/mL) s ostrými píkami a vysokým poměrem S/N.
• Standardní systém vykazoval potíže s detekcí fosfátovaných steroidů, zvyšující se citlivost až po opakovaných injekcích (projev pasivace).
• Premier kolona zajišťuje konstantní návratnost a symetrické píky už od první injekce, u standardní kolony byl patrný drift signálu a výrazné prodloužené chvostění.
• Kvantitativní parametry odpovídaly průmyslovým guidancím: lineární rozmezí 1–250 ng/mL (fosfáty) a až 1–1000 ng/mL (hydrokortison fosfát), R2 > 0,99, LLOQ 1 ng/mL se S/N od 13 do 278 a přesností a přesností v rámci ±15 %.

Přínosy a praktické využití metody

Nová konfigurace nabízí:

• Vyšší citlivost a reprodukovatelnost bez dlouhého pasivačního čištění.
• Rychlou analýzu v čase pod 7 minut.
• Spolehlivou kvantifikaci steroidních farmaceutik v rámci výzkumu, vývoje a výrobních procesů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Technologie MaxPeak HPS otevře cestu k aplikacím zaměřeným na další kovově citlivé analyty či biomolekuly. Očekává se rozšíření do vysoce propustných laboratorních pracovišť, implementace do automatizovaných postupů a kombinace s dalšími detekčními technikami pro komplexní farmaceutickou analýzu.

Závěr

Arc Premier System spolu s XSelect Premier HSS T3 kolonou významně zlepšily chromatografickou analýzu steroidních fosfátů. Metoda dosahuje nízkých mezer kvantifikace (1 ng/mL), vynikající návratnosti a opakovatelnosti bez potřeby pasivace, což představuje efektivní řešení pro náročné farmaceutické aplikace.

Reference

1. Viswanathan CT, Bansal S, Booth B et al. Quantitative Bioanalytical Methods Validation and Implementation: Best Practices for Chromatographic and Ligand Binding Assays. Pharm. Res. 2007;24:1962–1973.
2. Bansal S, DeStefano A. Key Elements of Bioanalytical Method Validation for Small Molecules. AAPS J. 2007;9:E109–114.