Separation and Quantitation of Oxysterol Compounds Using LC-MS/MS

Význam tématu

Oxysteroly, oxidované deriváty cholesterolu, hrají zásadní roli v regulaci buněčných funkcí a jsou spojovány s neurodegenerativními chorobami. Jejich přesná detekce a kvantifikace v biologických vzorcích umožňuje lepší porozumění patologických mechanismů a podporuje vývoj diagnostických a terapeutických přístupů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo vyvinout robustní a citlivou LC-MS/MS metodu pro současnou separaci a kvantifikaci 16 oxysterolů a příbuzných sloučenin v jednom analytickém běhu. Studie se zaměřila na optimalizaci chromatografických a hmotnostně spektrometrických podmínek s využitím různých ionizačních zdrojů.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byla využita ultrarychlá kapalná chromatografie (UHPLC) s kolonkou Shim-pack XR-ODS III (150×2,1 mm, 1,6 µm) a teplotou 10 °C, průtokem rozpouštědla 0,4–0,7 mL/min a objemem injekce 2 µL. Kvantifikace probíhala na Shimadzu LCMS-8060 triple kvadrupólovém hmotnostním spektrometru v režimu MRM. Pro ionizaci a detekci byly testovány zdroje ESI, APCI a duální DUIS, přičemž byly optimalizovány teploty rozhraní a proudění plynů.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila oddělení těžko rozlišitelných dvojic izomerů (24HC/25HC, 7αHC/7βHC) v celkovém čase 21 minut při maximálním tlaku kolem 11 000 psi. LOD a LOQ se pohybovaly v řádu jednotek až desítek pikogramů na kolonu, přičemž nejnižší meze detekce a kvantifikace byly dosaženy pro ketosteroly. DUIS kombinuje výhody ESI a APCI, což umožnilo jednotný běh bez ztráty citlivosti u zymosterolu a desmosterolu.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá analýza 16 oxysterolů v jedné sekvenci.
• Vysoká citlivost a nízké meze detekce v nízkých pikogramech.
• Efektivní rozlišení izomerů kritických pro biomarkerové studie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze adaptovat na klinické a toxikologické vzorky, rozšířit o další oxysteroly či příměsi. Integrace s automatizovaným zpracováním vzorků a široká validace napomůže využití v rutinní diagnostice a výzkumu neurodegenerativních onemocnění.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda na platformě Shimadzu Nexera UHPLC a LCMS-8060 nabízí rychlou, citlivou a reprodukovatelnou kvantifikaci oxysterolů. DUIS ionizační zdroj se ukázal jako optimální volba pro komplexní směsi bez nutnosti více separačních běhů.

Reference

• Shimadzu Corp. Application Note SSI-LCMS-082, October 2016.