Reducing Cycle Time for Charge Variant Analysis of Monoclonal Antibodies

Význam tématu

Analýza nabíjecích variant monoklonálních protilátek je klíčová pro sledování stability a kvality biotherapeutických výrobků. Přítomnost různých nabíjecích forem vzniká posttranslačními modifikacemi a ovlivňuje bezpečnost i účinnost léčiv.

Cíle a přehled studie

Studie popisuje zkrácení celkového cyklu analýzy nabíjecích variant pomocí iontově výměnné chromatografie s pH gradientem. Metodika kombinuje dva bi-inertní kvaternární pumpy Agilent 1260 Infinity a dvoupozicový/10-portový ventil Agilent 1200 Infinity pro alternující regeneraci dvou kolon. Cílem bylo snížit dobu jednoho cyklu a téměř zdvojnásobit průchod vzorků při zachování vysoké přesnosti.

Použitá metodika a instrumentace

Chromatografické podmínky:

• Iontově výměnná kolona Agilent Bio MAb PEEK (2×2,1×250 mm, 5 µm)
• pH gradient 6,4–7,0 v 30 mM fosfátovém pufru (Agilent Buffer Advisor)
• Flow rate 0,3 mL/min, objem injekce 7 µL, detekce DAD při 280 nm

Alternující regenerace:

• Dva moduly Agilent 1260 Infinity Bio-inert Quaternary Pump (G5611A)
• Agilent 1200 Infinity Quick-Change Bio-inert 2-position/10-port valve (G5632A)
• Agilent 1260 Infinity High-Performance Autosampler (G5667A)
• Agilent 1290 Infinity Thermostat a Column Compartment s bio-inert výměníky

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dovolila rozlišení šesti nabíjecích variant protilátky RAT Anti-DYKDDDDK Tag. Intra-column přesnost (n=6) byla pro retenční časy <0,31 % RSD a pro plošné integrály <2,8 % RSD (výjimka CV4). Inter-column přesnost (n=12) dosáhla <0,29 % RSD pro časy a <3,7 % RSD pro plochy. Alternující regenerace snížila celkový cyklus o 44 % a téměř zdvojnásobila průchodnost vzorků.

Přínosy a praktické využití metody

Vyšší automatizace a paralelní regenerace umožňují významné úspory času v rutině QC laboratoří biotechnologických i farmaceutických společností. Metoda zajišťuje vysokou reprodukovatelnost a robustnost měření při zkrácených časech analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Budoucí perspektivy zahrnují:

• Integraci s inteligentními softwarem pro návrh gradientů a monitoring
• Další automatizaci sekvenčních kroků pro vysokopropustné laboratoře
• Možnost automatického reportingu a připojení do LIMS systémů
• Rozšíření metodiky na další typy biotherapeutik a komplexní QC profily

Závěr

Alternující column regeneration s využitím dvou kvaternárních pump a rychlého ventilu Agilent významně zrychluje analýzu nabíjecích variant monoklonálních protilátek bez kompromisů v přesnosti a rozlišení.

Reference

1. Agilent Technologies Application Note 5991-3365EN: „Simple Method Optimization in mAb Charge Variant Analysis using pH Gradients Generated from Buffer Advisor with Online pH and Conductivity Monitoring“, 2013
2. Agilent Technologies Application Note 5991-1408EN: „Protein Separation with pH Gradients Using Composite Buffer Systems Calculated by the Agilent Buffer Advisor Software“, 2012