Ultrafast Analysis of Selective Serotonin Reuptake Inhibitors (SSRIs) in Human Serum by the Agilent RapidFire High-Throughput Triple Quadrupole Mass Spectrometry System

Význam tématu

Selektivní inhibitory zpětného vychytávání serotoninu (SSRIs) patří mezi nejrozšířenější skupiny antidepresiv s klíčovým významem v léčbě depresí a úzkostných poruch. Rychlá a spolehlivá kvantifikace těchto látek v lidském séru je zásadní pro terapeutické drug monitoring, farmakokinetické studie i hodnocení biologické dostupnosti. Zvýšené nároky na citlivost, specifitu a vysokou propustnost analytických metod vedou k hledání moderních řešení založených na hmotnostní spektrometrii s rychlým odběrem vzorků.

Cíle a přehled studie / článku

Autoři prezentují ultrarychlou metodu pro současné stanovení šesti SSRI (citalopram, N-desmethylcitalopram, fluoxetin, norfluoxetin, sertralin, paroxetin) v lidském séru. Cílem bylo dosáhnout lineární kvantifikace v rozsahu 10–500 ng/mL, včetně reprodukovatelné přesnosti a přesnosti (<10 % CV a odchylka v rámci ±10 %) při cyklovém čase 13 s na vzorek a throughput více než 250 vzorků za hodinu.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: do 100 µL séra se přidalo 100 µL 0,2 M roztoku síranu zinečnatého, poté 200 µL acetonitrilu s interním standardem citalopram-d6 (100 ng/mL). Po viraci a odstředění se vzorky naředily 1:10 vodou s 0,1 % kyselinou mravenčí a převedly do 96-well destičky.
• SPE/MS/MS: Agilent RapidFire 360 s C18 cartridgem (G9203-80105) pracující ve čtyřech RF stavech (odplach, eluce, regenerace) a Agilent 6490 Triple Quadrupole MS v MRM režimu s optimalizovanými přechody Q1→Q3 pro každý analyzát.
• Podmínky: průtok 1,5 mL/min (pumpa 1, voda + 0,1 % FA), 1,25 mL/min (pumpy 2 a 3, ACN + 0,1 % FA), teploty zdroje 250–300 °C, kapilární napětí 3500 V, dwell time 2–50 ms podle analyzátu.
• Software: Agilent MassHunter Qualitative Analysis B.05.00 a Quantitative Analysis B.05.00.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky všech šesti SSRI vykázaly vysokou linearitu (R²>0,99) v rozsahu 10–500 ng/mL. Intraday i interday přesnost a přesnost ležely v rámci ±10 % s CV <10 %. Detekční limity byly pod 5 ng/mL. Díky odplachu a eluci na C18 cartridgi nebyl pozorován žádný významný carryover. Celkový čas analýzy jednoho vzorku činil 13 s, což umožňuje zpracování více než 250 vzorků za hodinu.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zkrácení doby analýzy oproti tradičním LC/MS/MS metodám (>10×).
• Minimální spotřeba organických rozpouštědel a absence chromatografické kolony.
• Vysoká robustnost a reprodukovatelnost vhodná pro klinické laboratoře, farmakokinetiku a TDM.
• Snadná implementace do existujících pracovních postupů díky plné automatizaci RapidFire systému.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu analyz na další psychotropní a farmakologické látky.
• Integrace s online automatizovanými systémy pro kontinuální monitoring pacientů.
• Využití strojového učení pro rychlou interpretaci velkých datových objemů.
• Hybridní přístupy kombinující ultrarychlou SPE/MS s chromatografií pro potvrzení neznámých metabolitů.

Závěr

Popsaná SPE/MS/MS metodika na platformě Agilent RapidFire 360 a 6490 Triple Quadruple MS představuje vysoce výkonný a spolehlivý nástroj pro rychlou kvantifikaci SSRI v lidském séru. Dosahuje vynikající přesnosti, přesnosti a linearity při extrémně krátkém cyklu 13 s, což významně zvyšuje throughput a efektivitu analytických laboratoří.

Reference

1. Barlow D. H.; Durand V. M. Chapter 7: Mood Disorders and Suicide In: Abnormal Psychology: An Integrative Approach. Wadsworth Cengage Learning, Belmont, CA, 2009, s. 239.
2. Preskorn S. H.; Ross R.; Stanga C. Y. Selective Serotonin Reuptake Inhibitors In: Antidepressants: Past, Present and Future. Springer, Berlin, 2004, s. 241–262.