Instructions & Troubleshooting for HybridSPE® DPX® Tips

Význam tématu

Detekce malých molekul v biologických matricích metodou LC/MS/MS je výrazně ovlivněna iontovým potlačením působením endogenních fosfolipidů. Tyto látky se běžně koextrahují během přípravy vzorku a snižují citlivost a přesnost analýzy. HybridSPE-PL technologie nabízí jednoduchý a rychlý způsob odstranění fosfolipidů a zákalu způsobeného bílkovinami před samotnou chromatografií a hmotnostní spektrometrií.

Cíle a přehled studie / článku

Popisuje se postup přípravy vzorků biologické plazmy či séra za účelem hrubého odstranění proteinových a fosfolipidových interferencí pomocí patentovaných HybridSPE® DPX® tipů. Hlavním cílem je zajistit vzorek připravený k okamžitému vstupu do LC/MS nebo LC/MS/MS bez nutnosti následné odpařovací koncentrační úpravy.

Použitá metodika a instrumentace

Popis standardního pracovního postupu:

• Přídavek interní standardu a odebrání vzorku plazmy/sera.
• Precipitace proteinu 1% kyselinou mravenčí v acetonitrilu (poměr vzorek:acetonitril 1:3, obj./obj.).
• Vortex 1–3 minuty a odstředění (3000 rpm, 2–5 min).
• Přenos supernatantu do kolekční destičky.
• Předběžné kondicionování HybridSPE® DPX® tipů identickým roztokem 1% kyseliny v acetonitrilu.
• Třikrát opakované aspirace a dispensace supernatantu DPX® tipem pro odstranění fosfolipidů.
• Sběr eluátu pro přímou analýzu LC/MS/MS.

Instrumentace:

• LC/MS/MS systém vhodný pro analýzu malých molekul.
• HybridSPE® DPX® pipetovací tipy (30 mg pro 30–100 μl vzorku, 50 mg pro 100–300 μl vzorku).
• Automatizované pipetovací platformy (např. Tecan, Hamilton, INTEGRA) nebo manuální pipety.

Hlavní výsledky a diskuse

Technologie HybridSPE® DPX® odstraňuje 98–100 % endogenních fosfolipidů z plazmy do 300 μl objemu při zachování vysoké reproducibility. Eliminací fosfolipidů se snižuje iontové potlačení a zvyšuje citlivost detekce analytů. U menších objemů vzorku (<100 μl) je doporučeno použití 30 mg tipů, u větších (100–300 μl) 50 mg tipů. Podmínkou je zachování poměru vzorek:precipitující činidlo 1:3. Nízké výtěžky specifických látek (např. silně bazické či chelátující sloučeniny) lze řešit modifikací precipitace (1% dusičnan amonný v methanolu nebo 0,5% kyselina citrónová v acetonitrilu) s následným HybridSPE®-PL krokem.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou a vysoce efektivní přípravu biologických vzorků k LC/MS/MS analýze bez nutnosti složitého kapalného chromatografického či manometrického čištění.
Praktické výhody:

• Minimalizace iontového potlačení a zvýšení citlivosti.
• Redukce času na přípravu vzorku – přímý elutát k analýze.
• Kompatibilita s automatizovanými platformami a manuálními pipetami.
• Široké uplatnění v farmakokinetice, toxikologii, diagnostice a QA/QC laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj technologie může směřovat k:

• Integraci do plně automatizovaných pracovních toků s on-line LC/MS.
• Optimalizaci sorbentů pro specifické třídy směsí interferujících látek.
• Rozšíření aplikací na jiné typy molekul (peptidy, metabolity).
• Vývoj vícedimenzionálních sorpčních fází kombinujících odstranění fosfolipidů a dalších interferujících matricových komponent.

Závěr

HybridSPE® DPX® technologie představuje jednoduchý, univerzální a rychlý přístup k efektivnímu odstranění endogenních fosfolipidů a proteinového zákalu z biologických vzorků. Tím se zvyšuje spolehlivost a citlivost LC/MS/MS měření malých molekul v plazmě a séru, aniž by bylo třeba složitých dodatečných kroků či drahého vybavení.

Reference

Žádné explicitně uvedené reference v původním textu nebyly k dispozici.