UPC2 Method Development for Achiral Impurity Analysis

Význam tématu

Profilování nežádoucích látek v léčivých přípravcích je nezbytné pro zajištění jejich bezpečnosti, kvality a stability. Konvergence chromatografie nabízí ortogonální přístup k tradičnímu LC, minimalizuje spotřebu organických rozpouštědel a přináší vysokou rychlost analýzy.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout systematickou metodu achirální konvergence chromatografie (UPC²) pro analýzu metoklopramidu a jeho souvisejících nečistot. Studie představuje fáze vývoje metody, od výběru stacionární fáze až po optimalizaci složení modifikátoru a přísad.

Použitá metodika a instrumentace

Byl použit systém ACQUITY UPC² s detekcí PDA (3D, 200–410 nm; 2D, 270 nm) a SQD MS (ESI+/- 150–1200 Da). Stacionární fáze: ACQUITY UPC² BEH 2-EP kolona (3,0×100 mm, 1,7 µm). Mobilní fáze A: CO₂; B: 50:50 methanol/acetonitril se 2 g/L dusičnanu amonného a 2 % kyseliny mravenčí. Gradient 2→30 % B za 5 min, udržení 1 min. Průtok 2,0 mL/min, teplota kolony 50 °C, vzorek 10 °C, objem injekce 1 µL, doba běhu 6 min. Data spravována v Empower 3.

Hlavní výsledky a diskuse

Screening stacionárních fází ukázal nejlepší separaci na 2-EP koloni. Prodloužení gradientu mělo minimální vliv na rozlišení, zatímco příměs acetonitrilu do modifikátoru významně zlepšila rozlišení pozdně eluujících složek. Studie přísad ukázala, že dusičnan amonný zlepšuje tvar vrcholu u aminů, kyselina mravenčí u hydroxylových látek, kombinace obou přísad pak poskytla optimální tvar vrcholu pro celý soubor nečistot. Validita metody byla potvrzena porovnáním kontrolního a degradovaného vzorku metoklopramidu.

Přínosy a praktické využití metody

• Ortogonální doplněk k reverzní fázi LC pro odhalení neznámých nečistot
• Rychlá analýza (6 min) s nižší spotřebou rozpouštědel
• Vysoká specifičnost a citlivost vhodná pro splnění ICH a farmakopejních norem

Budoucí trendy a možnosti využití

• Prohloubení výzkumu interakcí mezi analytem a stacionární fází
• Rozšíření aplikace na další léčivé látky a suroviny
• Integrace s vysoce citlivou hmotnostní spektrometrií pro strukturní identifikaci
• Další optimalizace v duchu udržitelné chemie (zelená chromatografie)

Závěr

Systémový přístup k vývoji UPC² metody pro achirální analýzu metoklopramidu umožnil identifikovat klíčové proměnné ovlivňující rozlišení a tvar vrcholu. Vyvinutá metoda je rychlá, finančně i ekologicky efektivní a splňuje požadavky regulačních norem pro profilování nečistot.

Reference

• Jones MD et al. Analysis of Organic Light Emitting Diode Materials by UltraPerformance Convergence Chromatography Coupled with Mass Spectrometry (UPC²/MS). Waters Application Note 720004305EN, 2012.
• Jones MD et al. Impurity Profiling Using UPC²/MS. Waters Application Note 720004575EN, 2013.
• West C, Lesellier E. A unified classification of stationary phases for packed column supercritical fluid chromatography. J Chromatogr A. 2008;1191(1-2):21-39.
• West C, Khater S, Lesellier E. Characterization and use of hydrophilic interaction liquid chromatography type stationary phases in supercritical fluid chromatography. J Chromatogr A. 2012;1250:182-95.
• Lesellier E. Retention mechanisms in super/subcritical fluid chromatography on packed columns. J Chromatogr A. 2009;1216(10):1881-90.
• Zou W, Dorsey JG, Chester TL. Modifier effects on column efficiency in packed-column supercritical fluid chromatography. Anal Chem. 2000;72(15):3620-6.