Agilent AdvanceBio Oligonucleotide Columns and Oligonucleotide Standards

Význam tématu

Analýza syntetických oligonukleotidů hraje klíčovou roli ve vývoji moderních terapeutik, jako jsou antisense oligos, siRNA a aptamery, které cílí na virové infekce či rakovinu. Vysoká čistota a přesná charakterizace jsou nepostradatelné pro bezpečnost a účinnost těchto léčiv. Robustní chromatografické metody poskytují spolehlivé oddělení a identifikaci vedlejších produktů a neúplně zreagovaných sekvencí.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem dokumentu je představit vlastnosti a výhody sloupců Agilent AdvanceBio Oligonucleotide pro vysokorozlišovací separace oligonukleotidů na HPLC a UHPLC. Studie demonstruje:

• odolnost kolon při použití agresivních, alkalických mobilních fází,
• vysokou účinnost separace tritylovaných i deprotekovaných oligonukleotidů,
• kompatibilitu jak s iontově-párovými mobilními fázemi TEAA, tak TEA-HFIP vhodnými pro LC/MS.

Použitá metodika a instrumentace

V separacích je využito iontově-párové reverzní fáze:

• Trityl-on oligos: detekce odlišení plné délky s dMT skupinou,
• Trityl-off deprotekované oligos s TEAA nebo TEA-HFIP jako iontovým párem.

Kolony jsou vyrobeny z 2,7 µm superficially porous částic s endkape­m C18, odolných v rozsahu pH 3–11 při teplotě až 65 °C. Pro monitorování kvality se používá Oligonucleotide Resolution Standard.

Použitá instrumentace

• Agilent AdvanceBio Oligonucleotide Columns (2.1×50 mm, 100 Å, 2.7 µm),
• Agilent 1260 Infinity a 1290 Infinity II UHPLC systémy,
• Mobilní fáze: 100 mM TEAA v H₂O/ACN; 400 mM HFIP + 15 mM TEA v H₂O/MeOH,
• Detekce UV při 260 nm; MS analýza při negativní ionizaci.

Hlavní výsledky a diskuse

AdvanceBio kolony dosahují:

• dlouhé životnosti i při vysokém pH,
• rozlišení N a N−1 sekvencí pro standardní oligo délky 14, 17, 20 a 21 mer s šířkou špičky kolem 0,1–0,11 min,
• stabilitu v režimu TEA-HFIP umožňující LC/MS charakterizaci.

Grafy prokázaly minimální pokles retence ani po 300 injekcích a vysokou reprodukovatelnost standardů.

Přínosy a praktické využití metody

• Spolehlivá kontrola kvality syntézních produktů a odstraňování nečistot,
• Využití v analytické kontrole výroby terapeutických oligonukleotidů,
• Možnost přímé integrace s MS pro detailní charakterizaci sekvencí.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj:

• šíření aplikací na delší RNA sekvence a modifikované nukleotidy,
• optimalizace mobilních fází pro vyšší citlivost MS,
• automatizace přípravy a purifikace v high-throughput formátu.

Závěr

Agilent AdvanceBio Oligonucleotide kolony poskytují unikátní kombinaci vysokého rozlišení, robustnosti a kompatibility s různými iontově-párovými systémy. Zajišťují efektivní a reprodukovatelné separace klíčové pro vývoj a výrobu oligonukleotidových léčiv.

Reference

V textu nebyly uvedeny explicitní literární odkazy.