Quantitative Determination of Urinary COOH-THC for Forensic Toxicology: Comparison to a Validated Reference Method

Význam tématu

Analýza karboxylované formy THC (COOH-THC) v moči je zásadní pro forenzní toxikologii, protože poskytuje spolehlivá data o konzumaci konopí. S rostoucí legalizací konopí v USA narůstá poptávka po rychlých, přesných a robustních metodách pro kvantifikaci THC metabolitů v biologických vzorcích.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo ověřit nově vyvinutou zjednodušenou SPE metodu s Oasis PRiME HLB µElution deskou porovnáním s plně validovanou metodou externí laboratoře. Studie zahrnovala analýzu 25 autentických vzorků moče a statistické porovnání výsledků.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky moči byly pH upraveny a po hydrolýze KOH inkubací při 65 °C přivedeny na Oasis PRiME HLB µElution desku. Extrakce probíhala bez předchozí kondicionace:

• Vzorek: 350 µl moči + 25 µl interního standardu + 320 µl 50 % KOH
• Hydrolýza: 2 h při 65 °C
• Plnění SPE: 75 µl upraveného vzorku
• Promývání: 2 × 300 µl 25 % MeOH
• Eluce: 2 × 25 µl 60 % ACN/40 % IPA, následné doplnění 100 µl 40 % ACN v H2O
• Injekce: 5 µl do UPLC-MS/MS

Instrumentace:

• Oasis PRiME HLB µElution Plate
• ACQUITY UPLC I-Class s BEH C18 kol. (2.1 × 50 mm, 1.7 µm)
• Xevo TQ-S hmotnostní spektrometr

Hlavní výsledky a diskuse

Porovnáním s referenční metodou na 25 vzorcích (6.7–458 ng/ml) byla získána Demingova regrese se sklonem 0.995 a korelací R = 0.998, což ukazuje téměř dokonalou shodu. Bland-Altmanova analýza prokázala, že 95 % dat je v dohodnutém pásmu, a 78 % výsledků se lišilo méně než o 20 %, čímž metoda překračuje FDA-GLP kritérium 67 %. Mírný negativní bias byl připsán rozdílům v matici mezi autentickými vzorky a standardy.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda eliminuje potřebu kondicionace, sušení a reekvilibrace SPE fází, čímž zkracuje čas přípravy, minimalizuje ztráty analytu a snižuje riziko nespecifického vázání. Výborné zotavení a minimální maticové efekty zajišťují robustní kvantifikaci COOH-THC pro forenzní a klinickou praxi.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření použití Oasis PRiME HLB µElution pro další lipofilní metabolity v krvi a slinách, automatizace pracovních postupů a integrace s více-residuálními metodami pro simultánní analýzu drogových panelů.

Závěr

Zjednodušená SPE metoda s Oasis PRiME HLB µElution desky nabízí srovnatelné výsledky s plně validovanou referenční metodou, přičemž zkracuje čas přípravy a zachovává vysokou přesnost a opakovatelnost. Metoda je vhodná pro rutinní forenzní toxikologická vyšetření.

Reference

1. Zhang X., Danaceau J.P., Chambers E.: Quantitative Analysis of THC and Metabolites in Urine with a Simple, Fast, and Clean Oasis PRiME HLB µElution Plate. Waters Application Note 720005556EN (2015).
2. Booth B., Arnold M.E., DeSilva B. et al.: Workshop Report: Crystal City V – Quantitative Bioanalytical Method Validation and Implementation: The 2013 Revised FDA Guidance. The AAPS Journal 17(2), 277–288 (2015).