The Separation of ∆8-THC, ∆9-THC, and Their Enantiomers by UPC2 Using Trefoil Chiral Columns

Význam tématu

Cannabinoidy obsažené v rostlině Cannabis sativa L., zejména psychoaktivní Δ9-THC, se vyskytují v různých izomerních formách. Stereochemie těchto látek významně ovlivňuje jejich farmakokinetiku a farmakologické účinky. S ohledem na rozšířenou legalizaci konopí pro léčebné a rekreační účely je nutné přesně určovat složení a stabilitu THC izomerů v produktech.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout rychlou a spolehlivou metodu separace Δ8-THC a Δ9-THC a jejich enantiomerů pomocí ultrarychlé konvergentní chromatografie UPC2 na chirových Trefoil kolonách. Metoda byla optimalizována pro kvalifikativní i kvantitativní analýzu syntetických standardů a aplikována na komerční vzorek CBD oleje před a po kyselé konverzi.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda byla vyvinuta na systému ACQUITY UPC2 s PDA detektorem a softwarem MassLynx. Pro screening byla použita tři chirové kolony ACQUITY UPC2 Trefoil (AMY1, CEL1, CEL2; 2.5 µm, 3×150 mm). Mobilní fáze A byla superkritický oxid uhličitý, fáze B čistý ethanol. Optimální podmínky na koloně AMY1: izokratická eluce při 10–15 % ethanolu, teplota 50 °C, tlak 2000 psi, průtok 2 mL/min, objem injekce 1 µL, detekce při 228 nm.

Hlavní výsledky a diskuse

• Screening všech čtyř izomerů THC na třech chirových kolonách prokázal baseline separaci během 5 minut, nejvyšší rozlišení poskytla kolona AMY1.
• Optimalizace izokratických podmínek (15 % ethanolu) umožnila kompletní rozdělení izomerů za méně než 3 minuty.
• Kalibrační křivky pro čtyři stereoisomery byly lineární (R2 > 0,998) v rozsahu 0,003125–0,05 mg/mL s RSD ploch < 2 %.
• Aplikace na CBD olej odhalila nízkou výchozí přítomnost THC v kontrolním vzorku, tepelně ošetřený vzorek nevykazoval změny, zatímco při kyselé konverzi vzniklo cca 7,6 % (-)Δ9-THC a menší množství (-)Δ8-THC.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a vysoce rozlišená separace THC izomerů výrazně zkracuje čas analýzy oproti klasickým HPLC metodám.
• Metoda splňuje požadavky FDA na kvantifikaci stereoisomerního složení farmaceutických látek.
• Užitečné v QA/QC farmaceutické, potravinářské a forenzní analýze pro sledování stability a čistoty produktů obsahujících THC a CBD.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace ultrarychlé konvergentní chromatografie s hmotnostní spektrometrií pro identifikaci a kvantifikaci neznámých kanabinoidů.
• Rozšíření metodiky na širší spektrum fytokanabinoidů a jejich metabolitů v biologických a environmentálních matricích.
• Vývoj automatizovaných postupů pro online monitorování stability konopných produktů během výroby a skladování.

Závěr

Metoda UPC2 se na chirové Trefoil koloně AMY1 prokázala jako rychlý, reprodukovatelný a citlivý nástroj pro separaci a kvantifikaci Δ8-THC a Δ9-THC enantiomerů. Umožňuje efektivní kontrolu kvality a sledování konverze THC v komplexních matricích. Vzhledem k rostoucí poptávce po přesných analytických postupech v konopném průmyslu představuje tato publikace klíčový krok k standardizaci a kontrole čistoty kanabinoidů.

Reference

1. S Levin, S Abu-Lafi, J Zahalka, R Mechoulam, Resolution of Chiral Cannabinoids on Amylose Tris(3,5-dimethylphenylcarbamate) chiral stationary phase, Journal of Chromatography A, 654 (1993) 53–64.
2. Y Gaoni, R Mechoulam, The isomerization of cannabidiol to tetrahydrocannabinols, Tetrahedron, 22 (1966) 1481–1488.
3. C Layton, J Runco, A Aubin, Forced degradation of cannabidiol, Application Note, August 2016, 720005766EN.
4. T Tarbox, I Dilek, U Sreenivasan, K Yaser, A validated chiral HPLC method for resolution of Δ8 and Δ9-tetrahydrocannabinol enantiomers, Cerilliant Poster, EAS 2009.
5. L Ambach, F Penitschka, A Broillet, S Konig, W Weinmann, W Bernhard, Simultaneous quantification of delta-9-THC, THC-acid A, CBN and CBD in seized drugs using HPLC-DAD, Forensic Science International, 243 (2014) 107–111.