Eliminate your Application and Chromatography Challenges - Optimizing your Application/Method Transfer considerations

Význam tématu

Liquid chromatography je klíčová technika v analytické chemii pro oddělení a kvantifikaci složek komplexních směsí. Efektivní nastavení metod, řešení problémů a spolehlivý přenos mezi různými chromatografickými systémy jsou zásadní pro konzistentní výsledky ve farmaceutickém, potravinářském i environmentálním průmyslu.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem prezentace je poskytnout návody na:

• Troubleshooting metodiky a udržování čistoty mobilní fáze
• Optimalizaci přenosu metod mezi různými LC systémy
• Výběr a nastavení vhodného LC přístroje pro konkrétní aplikace

Použitá metodika a instrumentace

Studie vychází z praktických testů měření gradientního zpoždění (dwell volume), analýzy systémové disperze a porovnání výkonu čtyřkanálových kvaternárních a binárních pump. Dále je představeno jedním klikem ovládané emulační řešení ISET pro bezúpravový přenos metod. Použitá instrumentace:

• Agilent 1260 Infinity II Prime LC
• Agilent 1290 Infinity II Flexible Pump (Quaternary) a High Speed Pump (Binary)
• G4226A Autosampler, G1367E Autosampler
• Thermostatted Column Compartment (TCC) s PEEK restriktory
• G4212B DAD detektor
• ISET (Intelligent System Emulation Technology)
• A-Line Quick Connect UHPLC column fittings

Hlavní výsledky a diskuse

Analýza zpoždění gradientu ukázala:

• Binary pumpa 1290: 130 µl (10–90 %)
• Quat bez mixeru: 330 µl, s mixerem V380: 820 µl
• 1260 binární pumpa: až 545 µl

Disperzní ztráty v kapilárách se významně liší podle průměru (0,075–0,50 mm) a délky, což ovlivňuje účinnost a rozlišení. S menšími částicemi (1,8 µm) a krátkými kolonami se dramaticky zvyšuje tlak, ale i počet destiček (N). Technologie ISET dokáže věrně emulovat různé systémy a zachovat časy retencí a rozlišení bez potřeby úprav metody.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace sledovaných postupů umožňuje:

• Rychlejší identifikaci a odstranění příčin špatného rozlišení či změně retencí
• Bezproblémový přenos starších metod na moderní (U)HPLC systémy
• Optimalizaci spotřeby mobilní fáze a času analýzy
• Maximalizaci rozlišení využitím nízkodisperzních spojek a vhodných kapilár

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší rozšíření softwarových nástrojů pro automatický přenos a optimalizaci metod, zvýšený důraz na nízkodisperzní spoje a miniaturizaci systémů. Integrace umělé inteligence pro predikci výkonu a kontinuální samočisticí moduly slibují další zvýšení robustnosti a efektivity LC analýz.

Závěr

Komplexní pochopení extra-kolónové disperze, zpoždění gradientu a parametrů přístrojů je klíčové pro spolehlivou a reprodukovatelnou chromatografickou analýzu. Využití moderních emulačních technologií a nízkodisperzních spojů významně snižuje náklady na přenos metod a šetří čas i spotřebu reagencií.

Reference

5990-7595EN The LC Handbook: Guide to LC Columns and Method Development
5991-2359EN Two Dimensional Liquid Chromatography
5990-3777EN High Performance Capillary Electrophoresis
5991-5509EN Supercritical Fluid Chromatography
5989-6639EN Principles in Preparative HPLC
5991-3326EN Sample Preparation Fundamentals for Chromatography
5980-1397EN Fundamentals of UV-visible Spectroscopy