Separation of 16 Cannabinoids in Cannabis Flower and Extracts Using a Reversed-Phase Isocratic HPLC Method

Význam tématu

Konopí je složitá přírodní matrice obsahující více než stovku kanabinoidů s různými farmakologickými účinky. S rostoucí legalizací pro léčebné i rekreační účely roste potřeba spolehlivých analytických metod pro kvantifikaci hlavních i vedlejších kanabinoidů v rostlinách i extraktech. Přesná separace a identifikace je klíčová pro hodnocení účinnosti, bezpečnosti a kvality produktů.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo vyvinout jednoduchou izokratickou HPLC metodu schopnou separovat a kvantifikovat 16 kanabinoidů v rostlinných vzorcích a koncentrátech. Studie demonstruje rozlišení jak hlavních, tak minoritních kanabinoidů v jednom běhu během 26 minut, čímž zajišťuje vysokou přesnost a reprodukovatelnost výsledků.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu byl použit Waters Alliance HPLC systém vybaven 2998 PDA detektorem a CORTECS Shield RP18 kolonkou (2,7 µm, 4,6×150 mm). Metoda:

• Pohyblivá fáze A: voda s 0,1 % TFA; B: acetonitril; izokratický poměr A/B 41:59.
• Průtok 2,0 ml/min, teplota kolony 35 °C, detekce při 228 nm, objem injekce 5 µl.
• Software Empower 3 CDS pro řízení a zpracování dat.

Vzorky zahrnovaly homogenizovaný květ, extrakty z acetonitrilu nebo isopropanolu a ethanolu. Standardy pro 16 kanabinoidů byly získány jako DEA exempt roztoky a 5 hlavních sloučenin prokázalo lineární oblast 0,004–1,000 mg/ml.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla baseline separace všech 16 kanabinoidů (rozlišení >2,5) během 26 minut. Linearity pěti hlavních sloučenin vykázala koeficient R2 nad 0,999. Analýza pěti reprezentativních vzorků prokázala spolehlivé kvantitativní výsledky vyjádřené v procentech sušiny. Výhody izokratické analýzy spočívají v jednoduché přípravě a snížené variabilitě oproti gradientním metodám.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Rychlou a jednoduchou přípravu mobilních fází díky automatickému míchání.
• Vysokou přesnost a reprodukovatelnost kvantifikace hlavních i minoritních kanabinoidů.
• Možnost rozšíření pro rutinní QA/QC laboratoře a harmonizaci výsledků mezi různými laboratořemi.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj robustních metod pro profilování kanabinoidů včetně multi analytů a vyšších výkonových parametrů. Integrace s hmotnostní spektrometrií a automatizované zpracování dat umožní detailnější charakterizaci složení konopí a validaci nových farmakologických sloučenin.

Závěr

Izokratická HPLC metoda s Waters Alliance systémem a CORTECS Shield RP18 kolonkou prokázala schopnost spolehlivě separovat a kvantifikovat 16 kanabinoidů v konopných květech i extraktech za méně než 26 minut. Metoda splňuje požadavky na přesnost, lineární rozsah a reprodukovatelnost, což ji činí vhodnou pro rutinní analýzu v průmyslových i regulačních laboratořích.

Reference

• Radwan MM Wanas AS Chandra S ElSohly MA Natural Cannabinoids of Cannabis and Methods of Analysis Springer Cham 2017
• Layton CE Aubin AJ Method Validation for Assay Determination of Cannabidiol Isolates Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies 41 3 2018
• Layton CE Aubin AJ Considerations When Handling DEA Exempt Cannabinoid Reference Standard Preparations Used for Potency Determination Emerald Conference 2018
• Upton R Cannabis inflorescence Standards of Identity Analysis and Quality Control American Herbal Pharmacopoeia 2014
• Patel B Wene D Fan ZT Qualitative and Quantitative Measurement of Cannabinoids in Cannabis using a Modified HPLC DAD Method Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 146 2017
• Giese M et al Development and Validation of a Reliable and Robust Method for the Analysis of Cannabinoids and Terpenes in Cannabis Journal of AOAC International 98 6 2015
• Swartz ME Krull IS Handbook of Analytical Validation CRC Press Boca Raton 2012
• Waters Automated Solvent Blending Enhances HPLC Performance Perspectives 720000294EN 2003
• Waters Peak Purity Analysis Performance Perspectives wpp16 1996