MS Identification of Trace level Impurities from a Non-MS Compatible Mobile Phase Using ACQUITY UPLC System with 2D Technology by Heart-cutting and Online Sample Concentration
Technické články | 2018 | WatersInstrumentace
Orthofosforečná kyselina, běžný neslučitelný pufr pro MS, omezuje možnost hmotnostní detekce stopových nečistot. Srdcovité (heart-cutting) 2D UPLC s online koncentrací vzorku umožňuje selektivní izolaci a koncentrování analytů pro následnou hmotnostní analýzu bez nutnosti přestavby chromatografické metody.
Cílem bylo ověřit schopnost ACQUITY UPLC s 2D LC technologií k přímé MS identifikaci stopových nečistot z metody s neslučitelným mobilem. Studie demonstrovala workflow heart-cuttingu s opakovaným přenosem frakcí z první dimenze na trap kolonu a jejich eluci do druhé dimenze s hmotnostní detekcí.
Studie využila dvě dimenze UPLC: první dimenze s HSS C18 (2.1×100 mm) a mobilem 0,1 % ortofosforečné kyseliny v vodě/acetonitril, UV detekci při 210 nm a průtokem 0,5 mL/min. Heart-cut frakce byly online koncentrovány na trap Oasis HLB pomocí at-column dilution pumpy. Druhá dimenze s CSH C18 (2.1×50 mm) pracovala s vodou/acetonitrilem (flow 0,6 mL/min). Hmotnostní detekci prováděl Xevo TQD řízený MassLynx v4.1.
Opakované heart-cuttingy umožnily nashromáždit stopové nečistoty na trap kolonu a zvýšit citlivost analýzy. Druhá dimenze přinesla stabilní chromatogramy, kterých porovnání s blankem pomohlo přesně vymezit piky zájmu. MS spektra pro retenční časy 9,54 a 10,39 min ukázala charakteristické fragmenty potvrzující identitu nečistot.
Metoda nabízí rychlou adaptaci stávajících HPLC postupů s neslučitelnými pufry pro MS detekci bez offline frakčního sběru. Online koncentrace zvyšuje citlivost a spolehlivost identifikace stopových látek v komplexních matricích.
S narůstajícími požadavky na detekci ultra stopových sloučenin se předpokládá širší nasazení 2D UPLC s ACD a trap-kolonkami. Rozvoj MRM kvantifikace, automatizované heart-cut strategie a integrace s chemoinformatickými databázemi fragmentů umožní rychlejší a přesnější charakterizaci neznámých nečistot.
Heart-cutting 2D UPLC s online koncentrací na trap kolonu je účinný způsob, jak přenést neslučitelné HPLC metody na hmotnostní spektrometrii. Tento přístup minimalizuje úpravu metod a výrazně zvyšuje citlivost detekce stopových nečistot.
Příprava vzorků, LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ, 2D-LC
ZaměřeníVýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Orthofosforečná kyselina, běžný neslučitelný pufr pro MS, omezuje možnost hmotnostní detekce stopových nečistot. Srdcovité (heart-cutting) 2D UPLC s online koncentrací vzorku umožňuje selektivní izolaci a koncentrování analytů pro následnou hmotnostní analýzu bez nutnosti přestavby chromatografické metody.
Cíle a přehled studie
Cílem bylo ověřit schopnost ACQUITY UPLC s 2D LC technologií k přímé MS identifikaci stopových nečistot z metody s neslučitelným mobilem. Studie demonstrovala workflow heart-cuttingu s opakovaným přenosem frakcí z první dimenze na trap kolonu a jejich eluci do druhé dimenze s hmotnostní detekcí.
Použitá metodika a instrumentace
Studie využila dvě dimenze UPLC: první dimenze s HSS C18 (2.1×100 mm) a mobilem 0,1 % ortofosforečné kyseliny v vodě/acetonitril, UV detekci při 210 nm a průtokem 0,5 mL/min. Heart-cut frakce byly online koncentrovány na trap Oasis HLB pomocí at-column dilution pumpy. Druhá dimenze s CSH C18 (2.1×50 mm) pracovala s vodou/acetonitrilem (flow 0,6 mL/min). Hmotnostní detekci prováděl Xevo TQD řízený MassLynx v4.1.
Hlavní výsledky a diskuse
Opakované heart-cuttingy umožnily nashromáždit stopové nečistoty na trap kolonu a zvýšit citlivost analýzy. Druhá dimenze přinesla stabilní chromatogramy, kterých porovnání s blankem pomohlo přesně vymezit piky zájmu. MS spektra pro retenční časy 9,54 a 10,39 min ukázala charakteristické fragmenty potvrzující identitu nečistot.
Přínosy a praktické využití metody
Metoda nabízí rychlou adaptaci stávajících HPLC postupů s neslučitelnými pufry pro MS detekci bez offline frakčního sběru. Online koncentrace zvyšuje citlivost a spolehlivost identifikace stopových látek v komplexních matricích.
Budoucí trendy a možnosti využití
S narůstajícími požadavky na detekci ultra stopových sloučenin se předpokládá širší nasazení 2D UPLC s ACD a trap-kolonkami. Rozvoj MRM kvantifikace, automatizované heart-cut strategie a integrace s chemoinformatickými databázemi fragmentů umožní rychlejší a přesnější charakterizaci neznámých nečistot.
Závěr
Heart-cutting 2D UPLC s online koncentrací na trap kolonu je účinný způsob, jak přenést neslučitelné HPLC metody na hmotnostní spektrometrii. Tento přístup minimalizuje úpravu metod a výrazně zvyšuje citlivost detekce stopových nečistot.
Reference
- Root D. S., Wheat T. E., McConville P. Routine MS Detection for USP Chromatographic Methods. Waters Corporation, 2015.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Mass Detection Coupled to a USP Method for Lidocaine and Prilocaine Cream Using Multi-dimensional Liquid Chromatography
2018|Waters|Aplikace
[ APPLICATION NOTE ] Mass Detection Coupled to a USP Method for Lidocaine and Prilocaine Cream Using Multi-dimensional Liquid Chromatography Margaret Maziarz, Claude Mallet, Paul Rainville, and Mark Wrona Waters Corporation, Milford, MA, USA APPLICATION BENEFITS ■■ ■■ INTRODUCTION Easy…
Klíčová slova
cream, creamprilocaine, prilocaineusp, usplidocaine, lidocainedilution, dilutionminutes, minutesmanager, manageracquity, acquitymass, masstrap, trapintensity, intensityheart, heartloop, loopcutting, cuttingacn
Routine MS Detection for USP Chromatographic Methods
2015|Waters|Technické články
Routine MS Detection for USP Chromatographic Methods Daniel S. Root, Thomas E. Wheat, and Patricia McConville Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N B E N E F I T S INT…
Klíčová slova
pump, pumpuplc, uplcusp, uspacquity, acquitydilution, dilutionqda, qdacolumn, columnbeta, betawaste, wastechromatographic, chromatographichplc, hplcdetector, detectorpeak, peakacd, acdflow
Compliant Monitoring of Monoclonal Antibody Titer and Primary Structure Attributes Using a 2D-LC/MS System with UNIFI Informatics
2019|Waters|Aplikace
[ APPLICATION NOTE ] Compliant Monitoring of Monoclonal Antibody Titer and Primary Structure Attributes Using a 2D-LC/MS System with UNIFI Informatics Brooke M. Koshel, Robert E. Birdsall, and Ying Qing Yu Waters Corporation, Milford, MA, USA APPLICATION BENEFITS ■■ ■■…
Klíčová slova
tuv, tuvsmftn, smftnqsm, qsmdimension, dimensionbsm, bsmheart, heartacd, acdcut, cutsecond, secondrplc, rplcadd, addmpb, mpbvion, vionacquisition, acquisitionmonoclonal
Effective Determination of Pharmaceutical Impurities by Two Dimensional Liquid Chromatography
2017|Waters|Aplikace
[ APPLICATION NOTE ] Effective Determination of Pharmaceutical Impurities by Two Dimensional Liquid Chromatography Zhimin Li, Paula Hong, and Patricia McConville Waters Corporation, Milford, MA, USA APPLICATION BENEFITS ■■ ■■ INTRODUCTION Increase productivity through targeted Analysis of many pharmaceutical compounds…
Klíčová slova
acd, acdism, ismqsm, qsmsmftn, smftnbsm, bsmuplc, uplcacquity, acquityisomer, isomerdimension, dimensiontrap, traptuv, tuvpharmaceutical, pharmaceuticalimpurities, impuritiescis, cispda
