Comparison of Tandem and High Resolution Mass Spectrometry for the Quantification of the Monoclonal Antibody, Trastuzumab in Plasma
Technické články | 2018 | WatersInstrumentace
Rozvoj proteinových léčiv, zejména monoklonálních protilátek, vyžaduje spolehlivé bioanalytické metody k měření jejich koncentrace v biologických vzorcích. Kvantifikace mAb pomocí LC-MS přináší výhody v citlivosti, selektivitě a možnosti souběžně získat kvalitativní i kvantitativní data. Zvláště vysoko-rozlišovací hmotnostní spektrometrie (HRMS) nabízí detailní rozlišení signálů, což zlepšuje poměr signál/šum a rozšiřuje aplikační potenciál v bioanalytice.
Cílem práce bylo porovnat kvantitativní výkon tandemového kvadrupolu Xevo TQ-XS a kvadrupol-TOF hmotového spektrometru Xevo G2-XS QTof pro stanovení trastuzumabu v plazmě s využitím surrogate peptidového přístupu. Studie hodnotila limity kvantifikace, linearitu, přesnost a robustnost obou systémů.
Vzorek plazmy byl imunopurifikován na Protein A destičce, poté digesce proteázou trypsinem a čistění peptidů pomocí µElution SPE. Separace proběhla na ACQUITY UPLC H-Class s kolonkou Peptide BEH C18 v gradientu 5–50 % acetonitrilu s 0,1 % kyseliny mravenčí za 8 minut.
Pro kvantifikaci byly vybrány peptidy FTISADTSK a DTYIHWVR. Analýza na Xevo TQ-XS probíhala v režimu MRM. Na Xevo G2-XS QTof byly testovány tři módy: Tof-MRM s targetem fragmentu, Tof-MRM s targetem prekurzoru a full scan > prekurzor.
Tandemový kvadrupol dosáhl LLOQ 10–25 ng/mL a linearity ≥4,3 dekády. U HRMS byly nejlepší výsledky v režimu Tof-MRM s LLOQ 25–50 ng/mL a linearitou ≥4,0 dekády. Oba systémy prokázaly vysokou opakovatelnost: QC vzorky měly přesnost 85–115 % a variabilitu % CV pod 15 %. HRMS navíc umožnilo záznam full scan spekter, což přidává kvalitativní rozměr bez kompromisů v kvantifikaci.
Očekává se širší adopce HRMS v bioanalytice pro simultánní kvantifikaci více biologických látek a identifikaci metabolitů. Integrace full scan režimů do rutinních protokolů, automatizace přípravy vzorků a kombinace s datově řízenými přístupy (DIA) rozšíří možnosti multiplexních a komplexních analýz.
Porovnání ukázalo, že Xevo G2-XS QTof v režimu Tof-MRM nabízí citlivost a robustnost plně srovnatelnou s tradičním tandemovým kvadrupolem Xevo TQ-XS. HRMS pak navíc obohacuje bioanalytiku o kvalitativní informace bez ztráty kvantitativního výkonu.
Mary Lame, Caitlin Dunning, Yun Alelyunas, Mark Wrona: Comparison of Tandem and High Resolution Mass Spectrometry for the Quantification of the Monoclonal Antibody Trastuzumab in Plasma, Waters Corporation, 2018
LC/TOF, LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Rozvoj proteinových léčiv, zejména monoklonálních protilátek, vyžaduje spolehlivé bioanalytické metody k měření jejich koncentrace v biologických vzorcích. Kvantifikace mAb pomocí LC-MS přináší výhody v citlivosti, selektivitě a možnosti souběžně získat kvalitativní i kvantitativní data. Zvláště vysoko-rozlišovací hmotnostní spektrometrie (HRMS) nabízí detailní rozlišení signálů, což zlepšuje poměr signál/šum a rozšiřuje aplikační potenciál v bioanalytice.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem práce bylo porovnat kvantitativní výkon tandemového kvadrupolu Xevo TQ-XS a kvadrupol-TOF hmotového spektrometru Xevo G2-XS QTof pro stanovení trastuzumabu v plazmě s využitím surrogate peptidového přístupu. Studie hodnotila limity kvantifikace, linearitu, přesnost a robustnost obou systémů.
Použitá metodika a instrumentace
Vzorek plazmy byl imunopurifikován na Protein A destičce, poté digesce proteázou trypsinem a čistění peptidů pomocí µElution SPE. Separace proběhla na ACQUITY UPLC H-Class s kolonkou Peptide BEH C18 v gradientu 5–50 % acetonitrilu s 0,1 % kyseliny mravenčí za 8 minut.
Pro kvantifikaci byly vybrány peptidy FTISADTSK a DTYIHWVR. Analýza na Xevo TQ-XS probíhala v režimu MRM. Na Xevo G2-XS QTof byly testovány tři módy: Tof-MRM s targetem fragmentu, Tof-MRM s targetem prekurzoru a full scan > prekurzor.
Použitá instrumentace
- Waters ACQUITY UPLC H-Class
- ACQUITY UPLC Peptide BEH C18 Column
- Xevo TQ-XS Tandem Quadrupole MS
- Xevo G2-XS QTof Quadrupole Time-of-Flight MS
- ProteinWorks eXpress Digest Kit
- µElution SPE Clean-up Kit
Hlavní výsledky a diskuse
Tandemový kvadrupol dosáhl LLOQ 10–25 ng/mL a linearity ≥4,3 dekády. U HRMS byly nejlepší výsledky v režimu Tof-MRM s LLOQ 25–50 ng/mL a linearitou ≥4,0 dekády. Oba systémy prokázaly vysokou opakovatelnost: QC vzorky měly přesnost 85–115 % a variabilitu % CV pod 15 %. HRMS navíc umožnilo záznam full scan spekter, což přidává kvalitativní rozměr bez kompromisů v kvantifikaci.
Přínosy a praktické využití metody
- Vysoká citlivost a široký dynamický rozsah pro stanovení nízkých koncentrací mAb
- Vysoko-rozlišovací režimy zlepšují selektivitu a poměr signál/šum
- Možnost získat kvalitativní data v jednom běhu bez dodatečných analýz
- Rychlý vývoj metody díky peptidovému přístupu a modulární přípravě vzorku
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se širší adopce HRMS v bioanalytice pro simultánní kvantifikaci více biologických látek a identifikaci metabolitů. Integrace full scan režimů do rutinních protokolů, automatizace přípravy vzorků a kombinace s datově řízenými přístupy (DIA) rozšíří možnosti multiplexních a komplexních analýz.
Závěr
Porovnání ukázalo, že Xevo G2-XS QTof v režimu Tof-MRM nabízí citlivost a robustnost plně srovnatelnou s tradičním tandemovým kvadrupolem Xevo TQ-XS. HRMS pak navíc obohacuje bioanalytiku o kvalitativní informace bez ztráty kvantitativního výkonu.
Reference
Mary Lame, Caitlin Dunning, Yun Alelyunas, Mark Wrona: Comparison of Tandem and High Resolution Mass Spectrometry for the Quantification of the Monoclonal Antibody Trastuzumab in Plasma, Waters Corporation, 2018
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Optimizing Xevo G2-XS QTof Quadrupole Settings to Increase Sensitivity and Dynamic Range for the Analysis of Trastuzumab
2018|Waters|Technické články
[ TECHNOLOGY BRIEF ] Optimizing Xevo G2-XS QTof Quadrupole Settings to Increase Sensitivity and Dynamic Range for the Analysis of Trastuzumab Marian Twohig, Yun Alelyunas, Caitlin Dunning, and Mark Wrona Waters Corporation, Milford, MA, USA The development of complex biotherapeutic…
Klíčová slova
trastuzumab, trastuzumabdtyihwvr, dtyihwvrftisadtsk, ftisadtskmass, massquadrupole, quadrupolepeptide, peptidewindow, windowselection, selectionconc, conchrms, hrmscharge, chargeinterference, interferencesensitivity, sensitivityisobaric, isobaricbrief
High Sensitivity LC-MS/MS Quantification of Monoclonal Antibody Drugs in Rat Plasma Using a Standardized Sample Preparation Workflow
2018|Waters|Aplikace
[ TECHNOLOGY BRIEF ] High Sensitivity LC-MS/MS Quantification of Monoclonal Antibody Drugs in Rat Plasma Using a Standardized Sample Preparation Workflow Mary Lame, Caitlin Dunning, Steven Calciano, and Kelly Doering Waters Corporation, Milford, MA, USA Protein therapeutics, specifically monoclonal antibodies…
Klíčová slova
adalimumab, adalimumabnylawyqqkpgk, nylawyqqkpgkinfliximab, infliximabsinsathyaesvk, sinsathyaesvkquantification, quantificationiyptngytr, iyptngytrtrastuzumab, trastuzumablloq, lloqinitial, initiallliyaastlqsgvpsr, lliyaastlqsgvpsrglewvsaitwnsghidyadsvegr, glewvsaitwnsghidyadsvegrasqfvgssihwyqqr, asqfvgssihwyqqrbrief, briefleesggglvqpggsmk, leesggglvqpggsmklliysasflysgvpsr
Accurate Bioanalytical Peptide Quantification of Salmon Calcitonin Using High Resolution Mass Spectrometry (HRMS)
2018|Waters|Aplikace
[ TECHNOLOGY BRIEF ] Accurate Bioanalytical Peptide Quantification of Salmon Calcitonin Using High Resolution Mass Spectrometry (HRMS) Mary Lame and Nikunj Tanna Waters Corporation, Milford, MA, USA The Xevo G2-XS QTof Mass Spectrometer used for quantification of salmon calcitonin (extracted…
Klíčová slova
calcitonin, calcitoninsalmon, salmonxevo, xevoprecursor, precursorquantification, quantificationmrm, mrmbrief, briefserum, serumtof, tofhrms, hrmsmqc, mqclqc, lqchqc, hqccomparable, comparablesensitive
Accurate Quantification of intact Insulin-like Growth Factor I (IGF-I) using High Resolution Mass Spectrometry (HRMS) for Clinical Research
2017|Waters|Aplikace
[ TECHNOLOGY BRIEF ] Accurate Quantification of intact Insulin-like Growth Factor I (IGF-I) using High Resolution Mass Spectrometry (HRMS) for Clinical Research Nikunj Tanna, Mary Lame, Ian Edwards, and Mark Wrona Waters Corporation, Milford, MA, USA HRMS – with its…
Klíčová slova
igf, igfprecursor, precursorspiked, spikedbrief, briefconcentration, concentrationxevo, xevoweighting, weightingbiologics, biologicsmass, masstof, tofmrmprecursor, mrmprecursorneat, neatmrm, mrmhrms, hrmscurve
