Simultaneous Analysis of Water-soluble and Fat-soluble Vitamins in Fish by Reversed-Phase LC-MS/MS Method

Význam tématu

Vitaminy jsou nezbytné pro udržení zdraví a většina z nich je přijímána potravou. Ryby představují významný zdroj jak vodou rozpustných (skupina B), tak tukem rozpustných (A, D, E, K) vitamínů. Pro praktickou a efektivní kontrolu kvality potravin je žádoucí mít jeden analytický postup pro simultánní stanovení obou skupin vitamínů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout a validovat reverzně-fázovou LC-MS/MS metodu pro současné stanovení sedmnácti vitamínů (9 vodou rozpustných a 8 tukem rozpustných) v rybích vzorcích. Studie popisuje optimalizaci extrakce, chromatografie i kvantifikačních podmínek.

Použitá instrumentace

Shimadzu LCMS-8060 triple quadrupole se zdrojem ESI, kolona Kinetex PFP 150×2,1 mm, 2,6 µm. Použito MRM skenování v pozitivním módu, Ar jako kolizní plyn, dusík jako nesoucí a sušící plyn. Parametry teplot: blok 400 °C, ionizační rozhraní 350 °C, desolvace 250 °C.

Použitá metodika

Vzorky rybího masa byly homogenizovány, zmraženy a pro WSV extrahovány metodou methanol–hexan s následným odfiltrováním. Pro FSV byla použita extrakce methanol/water s askorbátem a hexan/ethylacetát, centrifugace a koncentrace pod dusíkem. Chromatografie probíhala gradientem: mobilní fáze A voda+0,1 % kys. mravenčí, B methanol+0,1 % kys. mravenčí. Gradient od 3 do 95 % B v průběhu 15 minut, průtok 0,4 mL/min, teplota 40 °C. Objem injekce: 2 µL pro WSV, 5 µL pro FSV.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla lineárních kalibračních křivek (R2>0,995) pro všech 17 vitamínů v rozsahu 0,5–100 ng/mL (WSV) a 1–100 ng/mL (FSV). LOQ byly v rozmezí 0,02–0,45 ng/mL pro WSV a 0,11–4,72 ng/mL pro FSV. Detekční limity (LOD) se pohybovaly 0,01–0,15 ng/mL pro WSV a 0,04–1,56 ng/mL pro FSV. Opakovatelnost (%RSD, n=3) byla 0,7–9,9 %. Recovery studie ukázaly 44,9–66 % pro většinu WSV a 61,3–100,5 % pro FSV, matrix efekt byl mírný pouze u vybraných sloučenin.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená metoda umožňuje rychlé, citlivé a robustní simultánní stanovení vodou i tukem rozpustných vitamínů v rybích vzorcích bez potřeby rozdělené chromatografie. Urychluje analýzu v potravinářských laboratořích a zvyšuje efektivitu kontroly kvality.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další optimalizace vzorkové přípravy může zlepšit zotavení a snížit matrix efekt. Metodu lze rozšířit na další potravinové matrice a integraci s vysokorychlostními nebo nanoLC systémy pro vyšší throughput. Potenciál má i automatizace extrakce.

Závěr

Vyvinutá reverzně-fázová LC-MS/MS metoda pro souběžné stanovení 17 vitamínů v rybách prokázala vysokou citlivost, linearitu i opakovatelnost a nabízí praktické řešení pro komplexní potravinářské analýzy.

Reference

• C. Fanali et al., Trends in Analytical Chemistry, 2017, 87, 82–97
• M. G. Giorgi et al., The Scientific World Journal, 2012, 359721
• Food and Agriculture Organization of the United Nations, The Composition of Fish
• M. Ishimaru et al., Food Analytical Methods, 2017, 10, 92–99