Lipid Mediator Profiling of Human Serum Using the Triple Quadrupole LC/MS/MS

Význam tématu

Bioaktivní lipidy neboli lipidové mediátory se podílejí na řadě fyziologických i patologických dějů, například zánětlivých a imunitních procesech. Spolehlivá a citlivá analýza těchto látek je zásadní pro biomarkerová studia a farmakologický výzkum.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit vysoce citlivou metodu pro profilování až 158 lipidových mediátorů a jejich metabolitů v séru člověka. Nový ultra-rychlý triple kvadrupólový spektrometr LCMS-8060 byl porovnán s konvenčním LCMS-8050, přičemž hlavními kritérii byly citlivost, opakovatelnost a rozsah kvantifikace.

Použitá metodika

Vzorek: 200 μl lidského séra extrahovaného metanolovým roztokem s vnitřními standardy, centrifugace a následný solid phase extraction (SPE) s elucí methanolem. Koncentrovaný eluát (10×) byl podroben HPLC separaci a MRM analýze.

Použitá instrumentace

• HPLC: Phenomenex Kinetex C8 (150×2.1 mm, 2.6 μm), mobilní fáze A: 0.1 % formic acid ve vodě, B: acetonitril; gradient 10→25→35→75→95 % B v časech 0–25 min; průtok 0.4 ml/min; teplota kolony 40 °C; objem injekce 5 μl.
• MS: Shimadzu LCMS-8060 triple kvadrupól, ionizace ESI v režimu pozitivním a negativním; nebulizační plyn 3.0 l/min; sušící plyn 10.0 l/min; ohřívací plyn 10.0 l/min; DL 250 °C; block heater 400 °C; interface 300 °C; CID plyn 230 kPa.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila detekci 85 analyzovaných lipidových mediátorů s poměrem signálu k šumu >3 a přesností retence <1 s. Citlivost LCMS-8060 byla přibližně třikrát vyšší než u LCMS-8050. Opakovatelnost měření byla v rozsahu CV 0.9–8.0 % pro vybrané analyty. Dynamický rozsah kvantifikace pokrývá podnanomolární až mikromolární koncentrace. Konzistentní poměry referenčních iontů potvrdily spolehlivost MRM analýzy.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje komplexní profilování lipidových mediátorů v klinických a výzkumných vzorcích. Je využitelná pro studium zánětlivých onemocnění, metabolických poruch a farmakologický screening.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření panelu analyzovaných lipidů, zrychlení číselné analýzy přes vyšší multiplex MRM, automatizace přípravy vzorků a integrace s dalšími omickými přístupy pro komplexní metabolomické studie.

Závěr

Vyvinutá metoda na LCMS-8060 poskytuje vysokou citlivost, opakovatelnost a široký dynamický rozsah pro analýzu lipidových mediátorů. Umožňuje robustní kvantifikaci biomarkerů v lidském séru a otevírá možnosti pro pokročilý výzkum a diagnostiku.

Reference

Nejsou uvedeny žádné specifické literární zdroje.