Analysis of Nivalenol, Deoxynivalenol, 3-Acetyldeoxynivalenol and 15-Acetyldeoxynivalenol Using Triple Quadrupole LC/MS/MS (LCMS-8050)

Význam tématu

Mykotoxiny nivalenol a deoxynivalenol spolu s jejich acetylderiváty patří mezi nejzávažnější kontaminanty obilovin způsobené plísněmi rodu Fusarium. Jejich přítomnost v potravinách a krmivech ohrožuje zdraví zvířat i lidí, a proto je klíčové zajistit citlivou a spolehlivou analytickou metodu pro jejich kvantifikaci.

Cíle a přehled studie

Cílem popsané studie bylo vyvinout a validovat vysoce citlivní LC–MS/MS metodu využívající triplekvadrupólového spektrometru pro současné stanovení nivalenolu, deoxynivalenolu a jejich metabolitů 3-acetyl- a 15-acetyl-deoxynivalenolu v potravinářských matricích. Metoda byla testována na standardních směsích i na vzorcích pšenice.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci analyzovaných sloučenin byl použit sloupcový chromatograf Shimadzu s kolonkou Shim-pack XR-ODS III (150 × 2,0 mm, 2,2 μm). Mobilní fáze A obsahovala 0,5 mmol/L octanu amonného ve vodě, fáze B byla acetonitril. Gradientní eluce probíhala od 5 % do 95 % fáze B s průtokem 0,3 mL/min při teplotě kolony 40 °C.
Detekce byla realizována na LCMS-8050 se zahřívanou elektrosprejovou ionizací v negativním módu. MRM přechody a kolizní energie:

• Nivalenol 371,05 > 281,20 (CE 16 V)
• Deoxynivalenol 355,10 > 59,00 (CE 22 V)
• 15-Acetyldeoxynivalenol 397,10 > 59,00 (CE 22 V)
• 3-Acetyldeoxynivalenol 397,10 > 59,00 (CE 26 V)

Vzorky pšenice byly extrahovány vodou/acetonitrilem (15:85, v/v), následně čištěny multifunkčními kolonami MultiSep #227 nebo Autoprep MF-T a koncentrovány pod dusíkem.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala excelentní liniaritu v rozsahu 1–250 ppb pro všechny čtyři látky (R2 > 0,999). Opakovatelnost retence (RSD ≤ 0,06 %) i plochy píku (RSD ≤ 6,5 %) byla velmi dobrá při 10 ppb standardních směsí. Recovery testy na extrahátech pšenice vykázaly spolehlivé procento obnovy 101–107 % bez významných matricových efektů.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje současné stanovení čtyř mykotoxinů s vysokou citlivostí a robustností. Díky nízkým detekčním limitům a dobré opakovatelnosti je vhodná pro rutinní kontrolu kvality obilnin, dodržování regulovaných limitů a ověřování bezpečnosti potravin a krmiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda lze rozšířit o další skupiny mykotoxinů včetně dalších acylovaných derivátů. V budoucnu je možné integrovat automatizovanou přípravu vzorků a využít vysokého rozlišení mass spectrometrů pro simultánní screening neznámých kontaminantů.

Závěr

Popisovaná LC–MS/MS metoda je rychlá, přesná a selektivní pro stanovení nivalenolu, deoxynivalenolu a jejich acetylderivátů v obilovinách. Splňuje požadavky na citlivost i opakovatelnost a nabízí spolehlivý nástroj pro laboratoře zaměřené na kontrolu kvality potravin.

Reference

• Notification No. 0521001, Pharmaceutical and Food Safety Bureau, Japonské ministerstvo zdravotnictví, práce a sociálních věcí, 21. 5. 2002.
• Notification No. 0717001, Pharmaceutical and Food Safety Bureau, Japonské ministerstvo zdravotnictví, práce a sociálních věcí, 17. 7. 2003.