Analysis of Chloramphenicol and Metabolites in Royal Jelly and Honey Using SPE Coupled with LC/MS/MS

Význam tématu

Královská želé a med jsou hodnotné potraviny, ale mohou obsahovat zbytky antibiotik jako chloramfenikol, thiamfenikol a florfenikol, včetně metabolitu florfenikolaminu. Spolehlivá analytika je klíčová pro ochranu spotřebitele, dodržení legislativních limitů a zajištění kvality potravin.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem této studie bylo vyvinout a validovat kvantitativní metodu pro stanovení chloramfenikolu, thiamfenikolu, florfenikolu a florfenikolaminu v královské želé a medu. Metoda kombinuje extrakci a očistu vzorku pomocí SPE se selektivní analýzou LC/MS/MS.

Použitá metodika a instrumentace

Popis postupu připravy vzorku a analýzy:

• Enzymatická hydrolytická extrakce: k 2 g želé přidáno 0,25 g trypsinu, 2 mL vody, inkubace 2 h při 40 °C, následně extrakce 8 mL acetonitrilu s 2 % NH₄OH.
• Centrifugace a sušení dusíkem: vzorek centrifugován 10 min při 4 °C, supernatant sušen N₂ do zbytkové vody, doplněn na objem 5 mL vodou.
• SPE cleanup: Agilent Bond Elut Plexa PCX (200 mg pro želé, 500 mg pro med), kondicionace MeOH a vody, naložení vzorku, praní teplou vodou, eluce metanolem s 8 % NH₄OH, sušení N₂ a rekonstituce v 10 % ACN/90 % vody.
• Chromatografie: gradientní eluce 10–100 % ACN s 0,1 % formiové kyseliny na kolonně Poroshell 120 EC-C18 (100 × 3,0 mm, 2,7 µm), tok 0,4 mL/min, injekce 5 µL.

Použitá instrumentace

• LC: Agilent 1260 Infinity II
• MS/MS: Agilent 6470 Triple Quadrupole s Jet Stream ESI
• Software: Agilent MassHunter Workstation

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala vysoké recuperace a nízké RSD:

• Královská želé (1–5 ng/g spiking): recuperace 85–117 %, RSD 0,6–6,9 %.
• Med (1–5 ng/g spiking): recuperace 79–106 %, RSD 0,4–5,3 %.

Vysoká citlivost a selektivita MRM režimu umožňuje spolehlivé sledování stopových kontaminantů v komplexních matricích.

Přínosy a praktické využití metody

• Efektivní odstranění matricových interferencí zajišťuje nízké pozadí.
• Vhodné pro rutinní kontrolu kvality v laboratořích QA/QC a regulačních agenturách.
• Metoda podporuje sledování souladu s legislativními limity antibiotik v potravinách.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace SPE a on-line propojení s LC/MS pro vyšší propustnost.
• Rozšíření spektra analyzovaných sloučenin o další antibiotika a jejich metabolity.
• Integrace s vysokorychlostními screeningovými technologiemi a HRMS pro nečekané znečištění.

Závěr

Vyvinutá a validovaná SPE LC/MS/MS metoda nabízí robustní, citlivé a reprodukovatelné stanovení chloramfenikolu, thiamfenikolu, florfenikolu a florfenikolaminu v královské želé a medu. Metoda je vhodná pro rutinní monitoring kvality potravin a splnění legislativních požadavků.