Quantitative Analysis of Choline in Milk Powder and Dietary Supplements by LC/MS Method

Význam tématu

Cholin je klíčová živina zabezpečující správnou funkci buněk a nervového systému člověka. Vzhledem k nemožnosti jeho endogenního syntézy v dostatečném množství je nutné jej přijímat potravou nebo doplňky stravy. Mléčné prášky a výživové doplňky představují běžné zdroje cholinu, a proto je přesná kvantifikace této látky zásadní pro kontrolu kvality a dodržení nutričních norem.

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem popsané práce bylo vyvinout a validovat citlivou a selektivní metodu pro kvantitativní stanovení cholinu v sušeném mléce a vybraných doplňcích stravy s využitím kapalinové chromatografie spojené s hmotnostní spektrometrií (LC/MS). Studie se zaměřila na zjednodušení přípravy vzorku, dosažení nízkého meze detekce (LOD) a zajištění krátké analýzy při vysoké opakovatelnosti.

Použitá metodika a instrumentace

V metodě bylo použito:

• Kapalinová chromatografie s HILIC separací na ZIC-pHILIC kolonce (150 × 4,6 mm, 5 µm) při izokratické eluci (80 % acetonitril / 20 % 5 mM roztoku amonného octanu),
• Shimadzu LCMS-2020 s ESI v pozitivním módu a detekcí v SIM režimu (m/z 104,2),
• Přístrojové podmínky: tok 0,8 mL/min, teplota kolony 40 °C, rozhraní 200 °C, DL 250 °C, dusík jako nosný a sušící plyn.

Příprava vzorků:

• Mléčný prášek: 1 g vzorku extrahovaný 1 % trichloroctovou kyselinou a acetonitrilem, sonikace 30 min, dvojnásobné odstředění, filtrace a 1 000násobné naředění.
• Tablety: mletí, extrakce ve vodě (objem odpovídá 1 mg cholinu), sonikace 30 min, filtrace a 100násobné naředění.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala:

• Lineární kalibraci v rozsahu 0,5–200 µg/L s koeficientem r2 > 0,999,
• Mezi desetinu ng/L (LOD ≈ 0,2 µg/L),
• Opakovatelnost (n = 6) s RSD plochy vrcholu 0,22–4,23 % a RSD retenčního času 0,02–0,15 %,
• Odlišení cholinu bez rušivých signálů díky SIM režimu, což zvyšuje selektivitu oproti HPLC-ELSD metodám.

Analýza reálných vzorků ukázala uspokojivé shody s deklarovanými obsahy:

• Dětské mléko: 57,1 µg/L (108 %) při deklarovaných 52,5 µg/L,
• Multivitaminová tableta: 111,8 µg/L (111 %),
• Tableta pro podporu hubnutí: 108,6 µg/L (108 %).

Přínosy a praktické využití metody

Navržená LC/MS postup umožňuje rychlé a spolehlivé stanovení cholinu v potravinářských a farmaceutických matricích s vysokou citlivostí na úrovni ppb. Zjednodušená příprava vzorků a krátký analytický čas podporují vysokou propustnost laboratoře a vhodnost pro rutinní QA/QC aplikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj mohou přinést:

• Multiparalelní monitorování komplementárních vitamínů a mikroživin v rámci jednoho běhu,
• Automatizace extrakčních kroků pro zvýšení reprodukovatelnosti a efektivity,
• Miniaturizace a integrace mikrofluidních systémů pro rychlá políčková měření.

Závěr

Vyvinutá LC/MS metoda v SIM režimu pro stanovení cholinu prokázala vynikající citlivost, selektivitu a opakovatelnost. Díky jednoduchému zpracování vzorku a robustním výsledkům je vhodná pro rutinní analýzu cholinu v mléčných výrobcích a výživových doplňcích.

Reference

1. Application Data Sheet, AD-0054, Shimadzu (2013)