Profiling of Bile Acids in Human Plasma Using Triple Quadrupole Mass Spectrometer

Význam tématu

Žlučové kyseliny jsou klíčovými biomolekulami syntetizovanými z cholesterolu, které usnadňují vstřebávání lipidů a regulují metabolické dráhy. Jejich profilace v plasmě je zásadní pro diagnostiku jaterních onemocnění, poruch žlučové sekrece a metabolických dysbalancí.

Cíle a přehled studie

Cílem tohoto příspěvku je představit optimalizovanou metodiku pro simultánní stanovení 28 různých žlučových kyselin a 10 interních standardů v lidské plasmě pomocí LC-MS/MS. Studie využívá LC/MS/MS Method Package for Bile Acids společně se systémem LCMS-8060 pro zajištění vysoké citlivosti a specifické kvantifikace.

Použitá metodika a instrumentace

Ultrafiltrace a srážení proteinů:

• 50 µl plazmy s 10 µl interního standardu
• Odstředění po přidání HCl a acetonitrilu, následná evaporace a rekonstituce v metanolu
• Sonikace a závěrečné odštědření před analýzou

Chromatografie a hmotnostní spektrometrie:

• UHPLC Nexera X2 s kolonkou Shim-pack G-BA C18, gradientní eluce (acetic acid/water a acetonitril/metanol), 0,3 ml/min, 40 °C
• LCMS-8060 v režimu ESI negativního iontu, MRM, optimalizované průtoky plynů a teploty (rozprašovací 2,0 l/min; sušící 10,0 l/min; topení 10,0 l/min; DL 250 °C; blok 400 °C; interface 300 °C)
• Stabilní izotopová ředicí metoda pro kvantifikaci

Hlavní výsledky a diskuse

Metodou bylo detekováno celkem 15 žlučových kyselin v lidské plasmě, včetně 1 primární, 3 sekundárních, 6 taurinem konjugovaných a 5 glycinen konjugovaných forem. Analytický běh trvá pouze 17 minut. Nejvyšší koncentrace byla naměřena u glykochenodeoxycholové a deoxycholové kyseliny (řádově stovky pmol/ml), nejnižší u tauroursodeoxycholové kyseliny (méně než 5 pmol/ml). Výsledky potvrdily vysokou selektivitu a reprodukovatelnost metody.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou a komplexní analýzu profilů žlučových kyselin s vysokou citlivostí a přesností. Je vhodná pro základní výzkum střevní mikroflóry, patofyziologické studie a klinické fáze vývoje biomarkerů jaterních či metabolických onemocnění.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšiřování metodiky o další konjugáty a méně obvyklé žlučové kyseliny, integrace s omics platformami, automatizace přípravy vzorků a vysokoprůchodové analýzy pro klinické biobanky.

Závěr

Optimalizovaný LC-MS/MS protokol spolu s LC/MS/MS Method Package for Bile Acids na systému LCMS-8060 poskytuje rychlé, citlivé a spolehlivé profily žlučových kyselin v lidské plasmě. Metoda přispívá k lepšímu pochopení patologických procesů a usnadňuje vývoj nových diagnostických nástrojů.