Quantitation of THC and THC Metabolites in Blood Using SOLAμ SPE Plates and the TSQ Quantiva Triple Quadrupole Mass Spectrometer for Forensic Analysis

Význam tématu

Analýza THC (tetrahydrokanabinolu) a jeho primárních (THC-OH, THC-COOH) a sekundárních (glukuronidů) metabolitů v krvi je zásadní pro forenzní toxikologii a stanovení doby konzumace konopí.
Kvantifikace těchto sloučenin umožňuje spolehlivé rozlišení nedávného užití od chronického nebo historického expozice.

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem je představit jednoduchou a nákladově efektivní metodu pro kvantitativní stanovení THC a čtyř hlavních metabolitů v krvi splňující požadavky forenzních laboratoří. Studie popisuje přípravu kalibrátorů a QC vzorků, optimalizaci chromatografie a hmotnostně spektrometrické detekce se zaměřením na citlivost, přesnost a robustnost metody.

Použitá metodika a instrumentace

• Odběr a příprava vzorků: 200 μl krevních vzorků s přídavkem deuterovaných interních standardů; proteinová precipitace následovaná SPE na SOLAµ SAX 96-jamkové desce.
• Chromatografie: 5minutová metoda na Accucore RP-MS koloni (100 × 2,1 mm, 2,6 μm) s mobilními fázemi 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě (fáze A) a 0,1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu (fáze B).
• Hmotnostní spektrometrie: Thermo Scientific TSQ Quantiva s Ion Max HESI zdrojem; pozitivní ionizace pro THC a THC-OH, negativní pro THC-COOH, THC-glukuronid a THC-COOH-glukuronid; sledování dvou SRM přechodů pro kvantifikaci a potvrzení.

Hlavní výsledky a diskuse

• LOQ: 0,2 ng/ml pro THC, THC-OH, THC-COOH; 0,5 ng/ml pro THC-glukuronid; 2 ng/ml pro THC-COOH-glukuronid.
• Lineární rozsah kalibrace až do 100 ng/ml pro THC, THC-OH, THC-COOH; 50 ng/ml pro THC-glukuronid; 500 ng/ml pro THC-COOH-glukuronid.
• Přesnost: intraassay RSD ≤ 9,4 %, meziassay RSD ≤ 8,8 %; metoda dosahuje 90–107 % recovery QC vzorků.
• Extrakční výtěžnost SPE: 25–82 %; matriční efekty (50–140 %) korigované interními standardy vedly k relativním recoveriám 83–120 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchá, rychlá a ekonomická příprava vzorku bez nutnosti odpařování a rekonstituce.
• Vysoká spolehlivost a robustnost pro forenzní stanovení potvrzená iontovými poměry.
• Detekce glukuronidů umožňuje přesnější posouzení nedávného konzumování konopí.
• Implementace na 2kanálovém LC systému Transcend II zvyšuje průchodnost až na 17 vzorků za hodinu (nárůst ~30 %).

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace do vysoce výkonných a plně automatizovaných LC-MS platforem pro klinickou toxikologii, dopravní kontrolu a dopingové testy.
• Další optimalizace extrakčních sorbentů a mikroextrakčních postupů pro zvýšení výtěžnosti a minimalizaci matričních efektů.
• Rozšíření analytického panelu o další kanabinoidy a aplikace na jiné biologické matice (sliny, moč).

Závěr

Metoda splňuje forenzní požadavky na citlivost, přesnost a robustnost pro kvantifikaci THC a jeho metabolitů v krvi. Díky jednoduché přípravě vzorku a absenci derivatizace přináší úsporu času a nákladů a umožňuje vysokou průchodnost v laboratorním provozu.

Reference

1. Schwope D. M.; Scheidweiler K. B.; Huestis M. Anal Bioanal Chem, 2011, 401(4), 1273–1283.