High-Sensitivity Analysis of Aldosterone in Low-Volume Serum Samples using Micro-Flow LC-MS/MS for Clinical Research

Význam tématu

Accurate and sensitive kvantifikace aldosteronu v séru je klíčová pro diagnostiku primárního aldosteronismu a dalších poruch nadledvin. Imunotesty mohou vykazovat křížovou reaktivitu a GC-MS vyžaduje náročnou přípravu vzorku. Micro-flow LC-MS/MS nabízí kompromis mezi citlivostí, specifičností a nízkým odběrem vzorku.

Cíle a přehled studie / článku

Studie popisuje vývoj a validaci metody pro stanovení aldosteronu v malém objemu lidské séra (10 µL) pomocí micro-flow LC-MS/MS. Cílem bylo dosáhnout LOQ na úrovni 1 pg/mL, širokého dynamického rozsahu a vysoké reprodukovatelnosti.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: 10 µL séra zkombinováno s 5 µL interního standardu d4-aldosterone, precipitace proteinů acetonitrilem, centrifugace a následná injekce supernatantu.
• Chromatografie: Shimadzu Nexera Mikros s trap-and-elute konfigurací, trapovací kolona CERI C8 (5 µm, 5×0,3 mm) a analytická mikrokolona PLONAS C18 (2,7 µm, 100×0,2 mm), tok 4 µL/min, gradientní eluce během 10 min.
• Detekce: Triple kvadrupólový hmotnostní spektrometr LCMS-8060 s micro-ESI, MRM přechody aldosteronu 359,20→189,30 a 359,20→331,35.

Hlavní výsledky a diskuse

• Kalibrace: Lineární rozsah 1–2500 pg/mL, koeficient determinace R2 > 0,9998, vážení 1/x2, akceptační kritéria 85–115 % (LOQ 80–120 %).
• LOQ: 1 pg/mL při splnění kritérií přesnosti (%RSD < 20 %) a správnosti.
• Preciznost na reálných vzorcích: Intra- i interdenní RSD < 8 % (6 dárců, 5 replikací), recovery 99–103 %.
• Matrix efekt: Srovnání signálu interního standardu v čistém roztoku, QC a reálných vzorcích nepotvrdilo významné potlačení ionizace.

Přínosy a praktické využití metody

Tato metoda umožňuje kvantifikaci aldosteronu při velmi nízkém objemu vzorku, což je zásadní pro pediatrické studie, výzkum malých laboratorních zvířat nebo omezený vzorek. Robustní výkon a jednoduchá příprava vzorku ji předurčují k využití v klinických i QA/QC laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Vývoj multiplexních metod pro současné stanovení více steroidů.
• Automatizace přípravy vzorku pro vysokopropustné analýzy v klinických studiích.
• Integrace vysoce rozlišovacích hmotových spektrometrů a pokročilých ionizačních technik pro komplexní profiling steroidů.

Závěr

Metoda micro-flow LC-MS/MS pro stanovení aldosteronu v lidském séru dosahuje vysoké citlivosti, preciznosti a specifičnosti s minimálním objemem vzorku. Je vhodná pro klinický výzkum, diagnostiku primárního aldosteronismu a rutinní laboratorní analýzy.

Reference

Nejsou uvedeny