Determination of vitamin A, 25-hydroxyvitamin D2/D3 and vitamin E in human serum by UPLC-MS/MS

Význam tématu

Monitoring hladin vitamínů A, D2/D3 a E v séru je klíčový pro hodnocení stavu výživy a diagnostiku onemocnění spojených s deficitem či nadbytkem těchto tukem rozpustných sloučenin. Spolehlivé a současně rychlé stanovení všech čtyř analyzovaných látek v jedné analýze zefektivňuje laboratorní workflow a přispívá k přesnější klinické interpretaci výsledků.

Cíle a přehled studie / článku

Autoři představili validaci metody pro simultánní kvantifikaci vitamínu A (retinol), 25-hydroxyvitaminu D2, 25-hydroxyvitaminu D3 a vitamínu E (tokoferol) v lidském séru. Primárním cílem bylo dosáhnout vysoké specificity, citlivosti i přesnosti v jediném chromatograficko-hmotnostním postupu, a to přičemž metoda musí splňovat požadavky rutinní laboratoře i klinické praxe.

Použitá metodika a instrumentace

Analýza vychází z extrakce tukových vitamínů z plazmy kapalně-kapalnou extrakcí s následnou separací na sloupci Shim-pack GIST C18 (2,1 × 50 mm, 2 μm). Detekce probíhala na hmotnostním spektrometru Shimadzu LCMS-8050CL v režimu MRM s ESI v pozitivním módu.

• Mobilní fáze: voda s 0,1 % kyselinou mravenčí a 1 mmol/l octanem amonným (A) a methanol s 0,1 % kyselinou mravenčí a 1 mmol/l octanem amonným (B).
• Gradient: 75 % B → 98 % B v 3,5 min; udržení do 5,5 min; návrat na 75 % B do 7 min.
• Teplota sloupce: 40 °C; průtok 0,4 ml/min; objem injekce 10 μl.
• Spektrometrie: Interface 350 °C, desolvace 150 °C, zážehový blok 500 °C, suchý plyn 15 l/min, čisticí plyn 5 l/min.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární odezvu pro retinol v rozsahu 80–1 349 ng/ml, 25-hydroxyvitamin D2 v 2,6–39,9 ng/ml, 25-hydroxyvitamin D3 v 2,9–51,1 ng/ml a vitamin E v 678–11 253 ng/ml, přičemž korelační koeficienty překročily 0,998. Mezidenní přesnost (CV) se pohybovala mezi 2,6–4,0 % a spolehlivost správnosti stanovení (accuracy) v kontrolních vzorcích odpovídala 89–110 %. Analýza klinických vzorků prokázala konzistentní výsledky v běžných koncentracích sledovaných vitamínů.

Přínosy a praktické využití metody

Výsledný postup umožňuje rychlé zpracování vzorků (7min běh) a vysokou selektivitu v prostředí komplexních biologických matric. Laboratoře tak mohou poskytovat komplexní profil vitamínů A, D a E v jednom běhu LC-MS/MS bez nutnosti dělených protokolů, což šetří čas i náklady a zvyšuje kvalitu klinických dat.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metodiky na další tukem rozpustné biomarkery a využití automatizovaných přípravných systémů pro zvýšení throughput v masových skríningových programech. Další vývoj může spočívat v miniaturizaci a integraci do point-of-care zařízení pro rychlé vyšetření vitamínového profilu na lůžku pacienta.

Závěr

Nově validovaný LC-MS/MS protokol pro simultánní stanovení vitamínu A, 25-hydroxyvitaminů D2/D3 a vitamínu E v lidském séru splňuje přísné požadavky na linearitu, přesnost i správnost a nabízí efektivní nástroj pro klinickou i výzkumnou praxi.

Reference

1. Sun L., Li C., Ren B., Li Y., Huang T. Determination of vitamin A, 25-hydroxyvitamin D₂/D₃ and vitamin E in human serum by UPLC-MS/MS. Shimadzu (China) Co., Ltd., Beijing, China.