Analysis of mAb Aggregates by Nexera Bio UHPLC with a Shim-pack Bio Diol (Size Exclusion) Column

Význam tématu

Monoklonální protilátky představují klíčovou skupinu biologik využívaných v terapii nádorových onemocnění. Kontrola agregace těchto proteinů je nezbytná, protože shlukování může snížit biologickou účinnost a zvýšit riziko imunogenních reakcí u pacientů.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo vyvinout a ověřit metodu velikostně vylučovací chromatografie (SEC) na UHPLC platformě pro rychlou a spolehlivou kvantifikaci monomeru, dimeru a vyšších agregátů biosimilárního bevacizumabu. Metoda byla testována na opakovatelnost a rozšiřitelnost na další monoklonální protilátky.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek bevacizumabu (1 mg/ml) byl připraven v 50 mmol/l Tris-HCl pufru (pH 8,0). Analýzu prováděla UHPLC soustava Shimadzu Nexera Bio UHPLC s UV detektorem nastaveným na 220 nm. Jako analytická kolona sloužil Shim-pack Bio Diol-300 (150 mm × 4,6 mm, 2 µm). Mobilní fáze obsahovala 150 mmol/l sodného fosfátového pufru (pH 7,0), průtok byl 0,2 ml/min, objem injekce 5 µl, eluce probíhala izokraticky při pokojové teplotě.

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatogram bevacizumabu ukázal rychlou analýzu do 15 minut s rozlišením monomeru a dimeru. Podíl monomeru byl 98,1 % a dimeru 1,9 %. Opakovatelnost retenčních časů i ploch píků (n = 6) dosáhla RSD nižší než 1 % u obou složek. Metoda byla aplikována na dvě další monoklonální protilátky, u nichž byla zjištěna monomerová čistota nad 95 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a citlivá analýza agregace pro QA/QC a vývoj biologik.
• Vysoká reprodukovatelnost a nízká variabilita výsledků.
• Možnost snadné implementace v regulovaných laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření na další klastry proteinových léčiv a kombinace s hmotnostní spektrometrií pro detailní identifikaci agregátů.
• Vývoj miniaturizovaných a automatizovaných platforem pro zvýšení throughput.
• Integrace dat do systémů umělé inteligence pro predikci stability a optimalizaci formulací.

Závěr

Validovaná SEC metoda na Nexera Bio UHPLC poskytuje rychlou, přesnou a vysoce reprodukovatelnou analýzu agregace monoklonálních protilátek, podporující vývoj a kontrolu kvality biosimilárního bevacizumabu i dalších biologik.