Purify with more Confidence and Flexibility

Význam tématu

Purifikace malých molekul preparativní kapalinovou chromatografií (HPLC) je klíčová pro vědecký i průmyslový výzkum, kde je nutné získat čisté analytické i preparativní vzorky. Flexibilita při volbě stacionární a mobilní fáze, včetně pH úpravy, významně ovlivňuje úspěšnost separace, výtěžek a čistotu cílových látek. Automatizované systémy s možností rychlé výměny kolony a rozpouštědla zkracují dobu analýzy a snižují riziko ztráty cenných sloučenin.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem této technické studie bylo demonstrovat práci Agilent 1290 Infinity II Preparative LC/MSD systému s automatickou volbou kolony a rozpouštědla pro separaci vzorku za nízkého (pH ~2) a vysokého pH (~10) v jednom běhu. Klíčovým ukazatelem úspěšnosti byla úplnost sběru frakcí a možnost zachránit část vzorku unikající standardnímu fraction collectoru.

Použitá metodika a instrumentace

Pro experimenty byl použit Agilent 1290 Infinity II Preparative LC/MSD System vybaven:

• 1260 Infinity II Isocratic Pump
• 1290 Infinity II Preparative Binary Pump (50 mL hlavy)
• 1290 Infinity II Preparative Open-Bed Sampler/Collector (5 mL vzorkovací klička)
• 1290 Infinity Valve Drive s 6polohovou/14portovou hlavou
• 1290 Infinity II MS Flow Modulator
• 2× 1260 Infinity II Diode Array Detector (preparativní průtoková kyveta)
• 1290 Infinity II Preparative Column Compartment
• 1260 Infinity II Valve-Based Fraction Collector + Recovery Collector
• LC/MSD XT detektor

Chromatografické podmínky zahrnovaly lineární gradient z 30 % na 85 % organického eluentu (acetonitril s 0,1 % HCOOH nebo bez modifieru), průtok 40 mL/min, objem injekce 1 000 µL a vyrovnané kolony C18 (30×150 mm, 5 µm). Mobilní fáze pro vysoké pH obsahovala 10 mM uhličitan amonný (pH = 10).

Hlavní výsledky a diskuse

Pod nízkopH podmínkami vykazovala základní sloučenina A silné špičkové vytékání a retenční ztrátu, což vedlo k 82 % frakčnímu výtěžku. Při vysokém pH došlo ke zlepšení tvaru píku a retenční síly, čímž se výtěžek zvýšil nad 99 % u všech tří komponent. Sběr frakcí byl řízen kombinovaným signálem UV a MS detektoru, přičemž recovery collector umožnil zachytit uniklou část píku A při nízkém pH.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Rychlé přepínání mezi až šesti kolónami a čtyřmi rozpouštědly přímo v nativní metodě
• Snížení manuálních zásahů a rizika ztráty vzorku díky recovery collectoru
• Zvýšení spolehlivosti frakční sběru pro cenné nebo limitované látky
• Univerzální aplikaci pro rozsáhlé preparativní i QC úlohy

Budoucí trendy a možnosti využití

Vývoj se bude zaměřovat na integraci inteligentních algoritmů pro predikci optimálního pH a složení eluční fáze, rozšíření rozsahu aplikovatelných pH médií a zelených rozpouštědel, dále na automatizované on-line sledování kvality frakcí a modulární rozšíření pro vyšší průtoky a objemové nároky.

Závěr

Agilent 1290 Infinity II Preparative LC/MSD system s automatickou volbou kolony a rozpouštědla poskytuje flexibilní platformu pro preparativní HPLC ve vícepH režimech. Správná volba pH mobilní fáze je rozhodující pro tvar píku, retenční sílu a celkový frakční výtěžek. Recovery collector navíc zvyšuje jistotu sběru a umožňuje efektivní záchranu zbytkových sloučenin.

Reference

Rieck F. Purify with more Confidence and Flexibility: InfinityLab LC purification solutions with column selection, solvent selection, and recovery collection. Agilent Technologies, Inc.; January 2020.