Jaké aplikační nebo technické možnosti přinášejí <a href="https://lcms.cz/products?category=37&amp;distributorItems=37&amp;manufacturerItems=10">nejnovější modely kapalinových chromatografů</a> nebo jejich spojení s <a href="https://lcms.cz/products?category=5&amp;distributorItems=37&amp;manufacturerItems=10">hmotnostními spektrometry</a> a dalšími periferiemi např. pro automatizaci přípravy vzorků nebo <a href="https://lcms.cz/products?category=3&amp;distributorItems=37&amp;manufacturerItems=10">vysokou propustnost</a>?
Zapomínat nesmíme ani na nejnovější <a href="https://lcms.cz/products?category=48&amp;distributorItems=37&amp;manufacturerItems=10">chromatografické HPLC kolony</a> nebo spotřební materiál, který dokáže nejednou Váš aplikační požadavek vyřešit lépe, nebo Vám ulehčit každodenní rutinu více, než ten nejvýkonnější hardware.
Podívejte se na trendy a novinky v dostupné literatuře z prvního pololetí 2022 od Agilent Technologies.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Lab_Rulez_Prehled_HPLC_a_LCMSD_aplikaci_od_Agilent_Technologies_H12022_988d8b4dc8/LabRulez-Prehled-HPLC-a-LCMSD-aplikaci-od-Agilent-Technologies-H12022.webp" alt="LabRulez: Přehled HPLC a LC/MS aplikací od Agilent Technologies H1/2022"/>
<h3>Kapalinová chromatografie (HPLC) 👉 <a href="https://lcms.cz/library?from=2022&amp;instrumentationItems=27&amp;mainauthorItems=10&amp;to=2022">Knihovna (23)</a></h3>
<ul>
<li>Converting a ChP Method of Related Compounds Analysis in Human Insulin to Agilent InfinityLab Poroshell 120 Columns (Aplikace | 2022)
</li>
<li>High-Throughput N-Glycans Profiling of Monoclonal Antibodies EG2-hFc and Rituximab Using the Agilent AdvanceBio Gly-X N-Glycan Prep with InstantPC Kit (Aplikace | 2022)
</li>
<li>A Workflow for Rapid Sample Preparation and Exoglycosidase Characterization of N-Glycans in Antibodies (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Oligonucleotide Purification using Ion Pair Reversed-Phase Liquid Chromatography (Ostatní | 2022)
</li>
<li>Oligonucleotide Purification using Anion Exchange Liquid Chromatography (Ostatní | 2022)
</li>
<li>Best Practices for Using an Agilent LC System - Technical Note (Technické články | 2022)
</li>
<li>Your InfinityLab HPLC Productivity Roadmap (Ostatní | 2022)
</li>
<li>Agilent InfinityLab Quick Change Valve G5640A - Instructions (Manuály | 2022)
</li>
<li>Improved Metabolomic Analysis Using an Iron-Free Flow Path (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Full/Empty Capsid Ratios in Adeno-Associated Virus 1 and 6 Serotypes Using Biocompatible Liquid Chromatography (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Lipid Nanoparticle Composition (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Temperature-Dependent Reaction Monitoring of an Ester Hydrolysis (Aplikace | 2022)
</li>
<li>ASMS: Analysis of Adeno-Associated Virus Quality Attributes with LC-FLD-(MS) (Postery | 2022)
</li>
<li>High-Throughput Human Serum and Immunoglobulin G N-Glycome Profiling with the Agilent AdvanceBio Gly-X InstantPC Technology for Biomarker Discovery (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Sialylated Glycan Modification in Protein Therapeutics (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Agilent Infinity Purification Solution Site Preparation Checklist (Manuály | 2022)
</li>
<li>ASMS: It’s time for LC/MS to Replace HPLC for Routine Cannabinoid Testing (Postery | 2022)
</li>
<li>Online Amino Acid Analysis for Spend Media Control (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Online LC Monitoring of a Hydrolysis of Organic Acid Esters by Means of a Flow Chemistry Reactor (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Fast and Selective Purification of Oligonucleotides Using Preparative HPLC/MS and Software Support (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Demonstrating Inertness for the Analysis of Nucleotides on the Agilent 1290 Infinity II Bio LC (Technické články | 2022)
</li>
<li>Demonstrating Inertness for the Analysis of Nucleotides on the Agilent 1290 Infinity II Bio LC (Technické články | 2022)
</li>
<li>Handbook of ICP-QQQ Applications using the Agilent 8800 and 8900 (Příručky | 2022)
</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Kapalinove_chromatografy_Agilent_Technologies_1260_BIO_HPLC_1290_UHPLC_SFC_1220_HPLC_7b799b65e0/HPST-Kapalinove-chromatografy-Agilent-Technologies-1260-BIO-HPLC-1290-UHPLC-SFC-1220-HPLC.webp" alt="HPST: Kapalinové chromatografy Agilent Technologies 1260 BIO HPLC, 1290 UHPLC , SFC, 1220 HPLC"/>
<h3>2D Kapalinová chromatografie (HPLC) 👉 <a href="https://lcms.cz/library?from=2022&amp;instrumentationItems=39&amp;mainauthorItems=10&amp;to=2022">Knihovna (3)</a></h3>
<ul>
<li>Simultaneous Impurity Analysis and Enantioseparation of Atenolol Using Achiral-Chiral 2D-LC (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Characterization of the Anticoagulant Nadroparin by 2D-LC With High‑Resolution MS (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Peptide/Protein-Related Impurities Using the Integrated Solution of Bio 2D-LC/Q-TOF in Agilent MassHunter Software (Technické články | 2022)
</li>
</ul>
<h3>Hmotnostní spektrometrie s jednoduchým kvadrupólem (LC/MS) 👉 <a href="https://lcms.cz/library?from=2022&amp;instrumentationItems=31-43&amp;mainauthorItems=10&amp;to=2022">Knihovna (5)</a></h3>
<ul>
<li>Simultaneous Impurity Analysis and Enantioseparation of Atenolol Using Achiral-Chiral 2D-LC (Aplikace | 2022)
</li>
<li>ASMS: Ensuring Reliable Results using Agilent’s New 7 Analyte System Suitability Standard with WalkUp and the LC/MSD iQ (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: It’s time for LC/MS to Replace HPLC for Routine Cannabinoid Testing (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Comparing LC/MS with LC/MS/MS for the Simultaneous Extraction and Analysis of Water-Soluble Vitamins and Fat-Soluble Vitamins in Multivitamin Supplements (Postery | 2022)
</li>
<li>Fast and Selective Purification of Oligonucleotides Using Preparative HPLC/MS and Software Support (Aplikace | 2022)
</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Hmotnostni_spektrometry_pro_kapalinovou_chromatografii_Agilent_Technologies_i_Q_SQ_6475_QQQ_6545_Q_TOF_d4a5234869/HPST-Hmotnostni-spektrometry-pro-kapalinovou-chromatografii-Agilent-Technologies-iQ-SQ-6475-QQQ.-6545-Q-TOF.webp" alt="HPST: Hmotnostní spektrometry pro kapalinovou chromatografii Agilent Technologies iQ SQ, 6475 QQQ, 6545 Q-TOF"/>
<h3>Tandemová hmotnostní spektrometrie s trojitým kvadrupólem (LC/QQQ) 👉 <a href="https://lcms.cz/library?from=2022&amp;instrumentationItems=31-35&amp;mainauthorItems=10&amp;to=2022">Knihovna (43)</a></h3>
<ul>
<li>Rapid and Sensitive Quantitation of Metanephrines and 3-Methoxytyramine in Human Plasma Using an Agilent Ultivo Triple Quadrupole LC/MS (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Pesticides in Celery (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Determination of Multiclass, Multiresidue Pesticides in Bell Peppers (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Determination of Multiclass, Multiresidue Pesticides in Spring Leaf Mix (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Determination of Per and Polyfluoroalkyl Substances in Soils Using Carbon S SPE by LC/MS/MS (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Quantitative LC/MS/MS Analysis of Ethyl Glucuronide and Ethyl Sulfate Using a Charged Surface-C18 Column (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of 510 Pesticides in Black Pepper (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Quantitative Analysis of Pesticides in Celery and Grape (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Ultra Fast Analysis of the Cocaine Metabolite (BZE) in Urine (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Ultrafast Plasma Protein Binding Analysis (Aplikace | 2022)
</li>
<li>A study of SIRT1- and SIRT2‑Mediated Deacetylation (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Pharmaceuticals and Personal Care Products (PPCPs) as Contaminants in Drinking Water by LC/MS/MS Using Agilent Bond Elut PPL (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Adrenal Steroids in Dried Blood Spots and Serum Using Agilent Ultivo LC/TQ (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Absolute Quantitation of Fragile Metabolites by Isotope Dilution Mass Spectrometry on the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS (Aplikace | 2022)
</li>
<li>LC/Q-TOF Marker Identification to TQ LC/MS Targeted Quantitation (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Cannabinoids and their Metabolites in Human Urine Using the Agilent Chem Elut S Plate by LC/MS/MS (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Quantification of Nine Nitrosamine Impurities in Sartan Drugs Using an Agilent GC-TQ (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Perfluoroalkyl Substances in Textile and Leather Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS (Aplikace | 2022)
</li>
<li>ASMS: High fidelity legacy-to-modern method transfer on the 6475 triple quadrupole LC/MS platform for large output production labs (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Sample Preparation Comparison of Large Peptide Quantification in Biological Matrix (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Comprehensive workflow for targeted cell metabolomics using automated sample preparation, HILIC chromatography, LC/TQ, and a statistical analysis software suite (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Active &amp; iterative data-dependent reinjection logic for maintaining throughput, uptime, and consistency in triple quadrupole LC/MS analysis (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Screening, Identification, and Quantitation of Drugs of Abuse in Human Whole Blood by LC/Q-TOF and LC/MS/MS (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: An end-to-end software algorithm for LC/MS/MS method development, optimization, and QA/QC deployment (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: An efficient pseudo-targeted metabolomics workflow based on liquid chromatography coupled with mass spectrometry (Postery | 2022)
</li>
<li>Simultaneous Identification, Confirmation and Quantitation of Impurity in Antibiotics Formulations Using Mixed Scan Mode of Ultivo LC/TQ (Postery | 2022)
</li>
<li>Highly Sensitive LC/MS/MS Method for the Simultaneous Quantification of Mutagenic Azido Impurity Analogues in Five Different Sartan APIs and Formulations (Aplikace | 2022)
</li>
<li>ASMS: Analysis of Multiclass Pesticide Residues in Dried Parsley Sample Using LC-MS and GC-MS (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Quantitative LC/MS/MS Analysis of Ethyl Glucuronide and Ethyl Sulfate using Charged Surface-C18 Column (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Development and Validation of a Quantitative Method for Multiresidue Pesticides in Food Matrices Using the Agilent 6475 LC/TQ System (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Multi-residue Method Development Using Agilent 6475 LC/TQ System Implemented with Intelligent Optimization Software: Application to Forensic Drug Screening (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Accelerated lifetime testing with real-time Early Maintenance Feedback (EMF) diagnostic monitoring on the 6475 triple quadrupole LC/MS (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Impact of Quadrupole Mass Resolution on Analytical Performance of MS/MS Assays using a triple quadrupole LC/MS system (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: An Easier, More Robust, and Faster Low- flow Quantitative Proteomics Approach (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Message in a Bottle: Analysis of Phosphatidylethanols in Whole Blood by Novel Solid Phase Extraction and LC/TQ (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: I Knew You Were Trouble: Trials and Tribulations of Method Development for Extended Pathway, Low-Volume, Plasma Catecholamine Assay by LC-MS/MS (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Rapid LC-MS/MS workflow for sensitive quantitation of Metanephrines and 3- Methoxytyramine in human plasma (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Comparing LC/MS with LC/MS/MS for the Simultaneous Extraction and Analysis of Water-Soluble Vitamins and Fat-Soluble Vitamins in Multivitamin Supplements (Postery | 2022)
</li>
<li>Determination of Per and Polyfluoroalkyl Substances in Drinking Water Using Agilent Bond Elut PFAS WAX SPE and LC/MS/MS (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Pesticide Residues in Spinach Using AOAC Pigmented dSPE with Carbon S Cleanup and LC/MS/MS (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Per- and Polyfluoroalkyl Substances (PFAS) in Aqueous Samples Per EPA Draft Method 1633 (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Agilent 6475 triple quadrupole LC/MS (Brožury a specifikace | 2022)
</li>
<li>Agilent 6470B Triple Quadrupole LC/MS with Agilent Jet Stream Source (Brožury a specifikace | 2022)
</li>
</ul>
<h3>Tandemová hmotnostní spektrometrie s vysokým rozlišením a přesnou hmotou (LC/Q-TOF) 👉 <a href="https://lcms.cz/library?from=2022&amp;instrumentationItems=31-29&amp;mainauthorItems=10&amp;to=2022">Knihovna (27)</a></h3>
<ul>
<li>Ultrafast Plasma Protein Binding Analysis (Aplikace | 2022)
</li>
<li>LC/Q-TOF Marker Identification to TQ LC/MS Targeted Quantitation (Aplikace | 2022)
</li>
<li>HRdm 2.0: Maximize Your IM Resolution Without Sacrificing Drift Range, Mass Range, or Data Acquisition Time (Technické články | 2022)
</li>
<li>Optimizing Separation of Oligonucleotides with Anion‑Exchange Chromatography (Aplikace | 2022)
</li>
<li>ASMS: An Innovation Solution of Multi-Methods Analysis for Central Carbon Metabolism and Broad Coverage of Metabolites Classes (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Metabolomics Study of Rodenticide Poisoning using Serum Samples with LCMS-QTOF Instrumentation (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Comparative Study of High-Resolution Q- TOF Fast Polarity Switching versus Single Polarity Data Acquisition on Mass Accuracy, Resolution and Analytical Sensitivity (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Comparison of High-Resolution Data Dependent MSMS Strategies for Best Precursor Coverage of Aqueous Film Forming Foam Formulations (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Analysis of Adeno-Associated Virus Quality Attributes with LC-FLD-(MS) (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Screening, Identification, and Quantitation of Drugs of Abuse in Human Whole Blood by LC/Q-TOF and LC/MS/MS (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: An efficient pseudo-targeted metabolomics workflow based on liquid chromatography coupled with mass spectrometry (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Refined LC/Q-TOF Methodology for Identification and Profiling of Bile Acids Produced from the Gut Microbiome (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Multi-Attribute Monitoring of Antibody Variants through Hydrophobic and Cation- Exchange Chromatography Coupled with Native Mass Spectrometry (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Bottom-up and Top-down Disulfide Bond Mapping of Beta-lactoglobulin on a Q-TOF with the Capability to Perform both CID and ECD (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Comprehensive, Automated, and Integrated Software for Oligonucleotide Characterization and Sequence Confirmation (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: The impact of Matrix effect in extraction efficiency of N-nitroso-N-methyl-4- aminobutyric acid in Metformin Extended- Release tablets using ESI-LC/HRMS (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Fine Structural Elucidation of Phospholipids with Practical Electron- Based Fragmentation on Q-TOF Instruments (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Analytical and Informatic Benefits from Automated Conversion of Ion Mobility Arrival Times to Collision Cross Sections in Raw Data Files (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Automated sample introduction method for high-throughput intact native protein analysis using collision induced unfolding coupled with drift-tube ion mobility-mass spectrometry (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: A Comprehensive Untargeted Metabolomics LC/Q-TOF Workflow with an Unknowns Identification Strategy to Identify Plasma Metabolite Shifts in a Mouse Model (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Novel Algorithms and Visualizations for Discovering Polymers and Chemical Series in Industrial and Environmental Applications (Postery | 2022)
</li>
<li>ASMS: Comparison of Drift-tube Ion Mobility and Structures for Lossless Ion Manipulation(SLIM) for the Characterization of Polysorbate, Polyethers, Surfactants Compounds (Postery | 2022)
</li>
<li>Adeno-Associated Virus Identity Confirmation in Biopharma by LC/MS (Ostatní | 2022)
</li>
<li>Characterization of the Anticoagulant Nadroparin by 2D-LC With High‑Resolution MS (Aplikace | 2022)
</li>
<li>An Integrated Workflow for the Analysis of Oligonucleotides and Their Impurities by Agilent High-Resolution LC/(Q-)TOF Mass Spectrometry (Aplikace | 2022)
</li>
<li>Analysis of Peptide/Protein-Related Impurities Using the Integrated Solution of Bio 2D-LC/Q-TOF in Agilent MassHunter Software (Technické články | 2022)
</li>
<li>High-throughput, Ion-Pairing-Free, HILIC Analysis of Oligonucleotides Using Agilent RapidFire Coupled to Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometry (Aplikace | 2022)
</li>
</ul>

Přehled HPLC a LC/MS aplikací od Agilent Technologies H1/2022

Kapalinové chromatografy (HPLC) a jejich spojení s hmotnostními detektory (LC/MS) a dalšími technikami se využívá v mnoha oblastech pro separaci, identifikaci a kvantifikaci širokého spektra analytů. V následujícím přehledu Vám přinášíme ty nejnovější rozdělené dle různých oblastí použití.
<blockquote>
💡<a href="https://lcms.cz/library?from=2023&amp;mainauthorItems=10&amp;to=2023">Všechny aplikace naleznete přímo ke stažení v knihovně LabRulezLCMS.</a> Pro přesnější selekci vyberte typ instrumentace nebo oblasti použití, která Vás zajímá. Vyhledávejte v téměř 3 000 HPLC a LC/MS dokumentech Agilent Technologies dostupných v knihovně.
</blockquote>
<h3>Farmaceutická analýza (17)</h3>
<ul>
<li>Native SEC/MS Analysis of mAbs on an Entirely Biocompatible Flow Path (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Oligonucleotide Characterization by Agilent 1290 Infinity II Bio LC and 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Dual-Reactor Sampling with Agilent InfinityLab Online LC Solutions (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Comparative Analysis of Agilent AdvanceBio Gly-X N-Glycan Prep (Aplikace | 2023)
</li>
<li>MS1 Oligonucleotide Characterization Using LC/Q‑TOF with HILIC Chromatography (Aplikace | 2023)
</li>
<li>MS/MS Oligonucleotide Sequencing Using LC/Q-TOF with HILIC Chromatography (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Analysis of Traditional Chinese Medicine Formula Granules for Quality Control (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Delivery of Reactants From a Batch Reactor Using the Agilent InfinityLab Online LC Solutions (Technické články | 2023)
</li>
<li>Characterization of IgG: Repeatability and Long-Term Performance of the Agilent MAB Column (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Aggregation Study of mAbs (Aplikace | 2023)
</li>
<li>GPC/SEC Analysis of Proteins From a Medium to High Molecular Mass Range (Aplikace | 2023)
</li>
<li>GPC/SEC Analysis of Proteins from Low to Medium Molecular Weight (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Investigation of Iron Polysaccharide Complexes by GPC/SEC Using RI and UV Detection (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Molecular Weight Determination of Dextran According to USP/EP Monograph (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Determination of Nitrosamine Impurities Using the Agilent 6475 Triple Quadrupole LC/MS System (Aplikace | 2023)
</li>
<li>The Agilent Thermal Equilibration Device Increases Resolution for Oligonucleotide Analysis (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Easy Column Screening for Lipid Nanoparticle Component Analysis (Aplikace | 2023)
</li>
</ul>
<blockquote>
<ul>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/135">Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/126">Agilent Ultivo Triple Quadrupole LC/MS</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/162">Agilent LC/MSD iQ Single Quadrupole System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/626">Agilent 6475 Triple Quadrupole LC/MS System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/164">Agilent 6545 LC/Q-TOF Quadrupole Time of Flight System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/165">Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF Quadrupole Time of Flight System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/170">Agilent RapidFire 400 High Throughput LC/MS System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/167">Agilent 6560 Ion mobility LC/Q-TOF Quadrupole Time of Flight System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/166">Agilent 6550 iFunnel LC/Q-TOF Quadrupole Time of Flight System</a></li>
</ul>
</blockquote>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Hmotnostni_spektrometry_pro_kapalinovou_chromatografii_Agilent_Technologies_i_Q_SQ_6475_QQQ_6545_Q_TOF_d4a5234869/HPST-Hmotnostni-spektrometry-pro-kapalinovou-chromatografii-Agilent-Technologies-iQ-SQ-6475-QQQ.-6545-Q-TOF_l.webp" alt="HPST: Hmotnostní spektrometry pro kapalinovou chromatografii Agilent Technologies iQ LC/MSD, 6475 LC/QQQ a 6545 LC/Q-TOF"/>
<h3>Klinická analýza (1)</h3>
<ul>
<li>Quantification of Frataxin-M Protein, a Blood Biomarker of the Rare Disease Friedreich’s Ataxia (Aplikace | 2023)</li>
</ul>
<h3>Lipidomika (1)</h3>
<ul>
<li>Mastering HILIC-Z Separation for Polar Analytes (Aplikace | 2023)</li>
</ul>
<h3>Materiálová analýza (16)</h3>
<ul>
<li>Analysis of Short- and Medium- Chain Chlorinated Paraffins in Textiles and Leather Using Triple Quadrupole LC/MS (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Characterization of Hydroxypropyl Cellulose with GPC/SEC (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Characterization of Polysulfone and Polyethersulfone with GPC/SEC (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Characterization of Lignin Sulfonate Using GPC/SEC (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Characterization of Polystyrene Sulfonic Acid (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Characterization of Chitosan Using GPC/SEC (Aplikace | 2023)
</li>
<li>GPC/SEC Analysis of Poly(2-vinylpyridine)s (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Characterization of Polyethylene Terephthalate with GPC/SEC (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Characterization of Polyethylene with GPC/SEC (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Characterization of Polypropylene Recyclates with GPC/SEC (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Characterization of Poly(L-lactide) (Aplikace | 2023)
</li>
<li>GPC/SEC with SDV Columns and 2-Methyltetrahydrofuran (Aplikace | 2023)
</li>
<li>GPC/SEC Analysis of Oligomers and Low Molar Mass Polymers in THF (Aplikace | 2023)
</li>
<li>GPC/SEC-MALLS Analysis of Hyaluronic Acid (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Saccharide and Polysaccharide Analysis (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Molecular Weight Cut-Off Determination for Polysulfone Membranes (Aplikace | 2023)
</li>
</ul>
<blockquote>
<ul>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/466">Agilent 1260 Infinity II Bio-Inert LC System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/155">Agilent 1260 Infinity II LC System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/467">Agilent 1260 Infinity II Prime Bio LC System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/468">Agilent 1290 Infinity II Bio LC System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/469">Agilent 1260 Infinity II Prime LC System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/154">Agilent 1290 Infinity II LC System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/157">Agilent 1260 Infinity II SFC a SFC/UHPLC System</a></li>
<li>💡 <a href="https://lcms.cz/products/156">Agilent 1220 Infinity II LC System</a></li>
</ul>
</blockquote>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Kapalinove_chromatografy_Agilent_Technologies_1260_BIO_HPLC_1290_UHPLC_SFC_1220_HPLC_7b799b65e0/HPST-Kapalinove-chromatografy-Agilent-Technologies-1260-BIO-HPLC-1290-UHPLC-SFC-1220-HPLC_l.webp" alt="HPST: Kapalinové chromatografy Agilent Technologies 1260 BIO HPLC, 1290 UHPLC, SFC a 1220 HPLC"/>
<h3>Metabolomika (3)</h3>
<ul>
<li>An End-to-End Targeted Metabolomics Workflow (Brožury a specifikace | 2023)
</li>
<li>A Metabolomics Approach to Multivariate Analysis of Black Pepper Using LC/Q-TOF (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Mastering HILIC-Z Separation for Polar Analytes (Aplikace | 2023)
</li>
</ul>
<h3>Potraviny a zemědělství (10)</h3>
<ul>
<li>Determination of Over 300 Pesticides in Cayenne Pepper (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Determination of Over 300 Pesticides in Cinnamon (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Analysis of Aflatoxins in Corn and Peanuts Using Immunoaffinity Chromatography and the Arc HPLC System (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Determination of Over 300 Pesticides in Tobacco (Aplikace | 2023)
</li>
<li>A Newly Modified QuEChERS Method for Multiresidue Pesticide Determination in Black Pepper Using LC/TQ (Aplikace | 2023)
</li>
<li>A Metabolomics Approach to Multivariate Analysis of Black Pepper Using LC/Q-TOF (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Determine Sugars and Artificial Sweeteners in a Single Run (Aplikace | 2023)
</li>
<li>GPC/SEC-Viscometry for Molar Mass and Structural Analysis of Carrageenan (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Analysis of Phosphate and Other Phosphorus Anions Using the Agilent 7100 CE (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Comparison of Plant-Based Meat Alternatives and Meat (Aplikace | 2023)
</li>
</ul>
<h3>Proteomika (1)</h3>
<ul>
<li>Mastering HILIC-Z Separation for Polar Analytes (Aplikace | 2023)</li>
</ul>
<h3>Průmysl a chemie (3)</h3>
<ul>
<li>Delivery of Reactants From a Batch Reactor Using the Agilent InfinityLab Online LC Solutions (Technické články | 2023)
</li>
<li>Uncompromising Analysis of Polymers and Macromolecules (Brožury a specifikace | 2023)
</li>
<li>Analysis of Inorganic and Organic Anions in Galvanic Samples Using the Agilent 7100 CE (Aplikace | 2023)
</li>
</ul>
<h3>Životní prostředí (3)</h3>
<ul>
<li>Analysis of Per- and Polyfluoroalkyl Substances (PFAS) in Solid Samples (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Understanding Toxicity and Formation of Chlorinated Products of 1,3-Diphenylguanidine (DPG) in Water (Aplikace | 2023)
</li>
<li>Ultra-Trace Quantification of Per- and Polyfluoroalkyl Substances (PFAS) in Drinking Water (Aplikace | 2023)
</li>
</ul>

Přehled HPLC a LC/MS aplikací Agilent Technologies 01-05/2023

Syntetické oligonukleotidy jsou krátké řetězce RNA nebo DNA nejčastěji o počtu 15 až 100 jednotek nukleotidů. Mají široké využití v oblasti výzkumu, v genetice i ve forensních vědách. Tato skupina sloučenin zahrnuje i malé interferující RNA, terapeutické antisense oligonukleotidy, aptamery a CRISPR vodící RNA (CRISPR guide) (1). Tyto látky se vyrábějí synteticky, často s modifikací základní kostry nebo cukru na 2´pozici kvůli stabilitě a farmakologickým účinkům.
Syntéza <a href="https://lcms.cz/library?manufacturerItems=1&amp;search=oligonucleotides">oligonukleotidů</a> je poměrně složitý proces, kdy při jednotlivých cyklech vzniká řada vedlejších produktů. Při vývoji a výrobě těchto látek je proto nezbytná podrobná charakterizace nečistot i cílového produktu a jeho purifikace. Charakterizace oligonukleotidů zahrnuje potvrzení jejich molekulové hmotnosti, sekvence nukleotidů, čistoty finálního oligonukleotidu a relativní kvantifikace specifických nečistot. V tomto článku se dozvíte, jaké nástroje nabízí společnost Agilent pro tuto oblast.
<h3>HPLC separace oligonukleotidů</h3>
Chromatografická separace oligonukleotidů se provádí metodami HPLC, nicméně samotná analýza skrývá řadu nástrah. Oligonukleotidy jsou poměrně polární a především obsahují mnoho záporně nabitých fosfátových funkčních skupin. Separace na běžné reverzní fázi není vhodná z důvodu malé retence. LC separace se proto provádí na silných anexech (SAX) ¹’² anebo pomocí iontopárové chromatografie na reverzní fázi (IP-RP) ³’⁴, s triethylaminem jako nejběžnějším iontově párovým činidlem, což je metoda potenciálně kompatibilní i s hmotnostně spektrometrickou detekcí.
Problémem je, že iontopárové činidlo zůstává dlouho v celém LC/MS systému a jeho použití není vhodné v laboratořích, kde je MS detektor využíván i pro jiné aplikace, především v režimu pozitivní ionizace. V nedávno publikovaných aplikačních poznámkách byla s úspěchem použita i separace na chromatografii s hydrofilní-lipofilní interakcí HILIC⁵’⁶, při které se iontopárové činidlo nepoužívá.
Přítomnost velmi polárních fosfátových skupin také vede k negativním sorpčním jevům v běžných HPLC systémech, které obsahují nerezové komponenty. Proto je vhodnější využívat (U)HPLC systémy z ušlechtilých slitin bez přítomnosti železa, které se označují jako biokompatibilní popř. bioinertní. Agilent pro tuto analýzu přímu doporučuje systém <a href="https://lcms.cz/products/468">1290 Infinity II Bio ve variantě UHPLC</a> (1300 bar) nebo <a href="https://lcms.cz/products/467">Prime</a> (800 bar) a <a href="https://lcms.cz/products/185">kolony série AdvanceBio</a>.
<h3>Stanovení čistoty oligonukleotidů</h3>
Získání vysoce čistých syntetických oligonukleotidů není snadné. Platí, že s délkou řetězce cílové molekuly klesá výtěžnost výroby a zvyšuje se podíl nečistot. Nečistoty vzniklé při syntéze zahrnují molekuly s kratším nebo naopak delším nukleotidovým řetězcem, nekompletní thiolací, případně se ztrátou bází. K dalším nečistotám patří produkty konverze fosforothioátů na fosfodiestery, produkty oxidace, enzymové nukleázové degradace nebo nečistoty s přítomností chránících skupin, používaných ve výrobě.
Pro stanovení čistoty oligonukleotidů nabízí Agilent dvě ucelená řešení pomocí metod LC/UV nebo LC/MS, viz obrázek níže. Co se týče MS detektoru, je zde dostačující jednoduchý kvadrupól popřípadě TOF MS, který lze zároveň využít pro profilování nečistot diskutované v následujícím odstavci.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Altium_Analyza_a_purifikace_syntetickych_oligonukleotidu_od_zacatku_do_konce_Od_vyzkumu_a_vyvoje_po_produkcni_QA_QC_Agilent_reseni_pro_analyzu_oligonukleotidu_bd3cf30bc8/Altium:-Analyza-a-purifikace-syntetickych-oligonukleotidu-od-zacatku-do-konce.-Od-vyzkumu-a-vyvoje-po-produkcni-QA-QC_Agilent-reseni-pro-analyzu-oligonukleotidu.jpg" alt="Altium: Agilent řešení pro analýzu oligonukleotidů"/>
<h3>Potvrzení hmoty produktu a profilování nečistot</h3>
Podrobná charakterizace vzorku obnáší nejen potvrzení hmoty cílového oligonukleotidu, ale také identifikaci a relativní kvantifikaci nečistot. Vzhledem k rozmanitosti potenciálních nečistot a jejich stopovému množství vůči hlavnímu produktu potřebujeme při profilování nečistot pokročilé analytické metody jako je LC/MS. Zároveň se v rutinní analýze neobejdeme bez pokročilých softwarových nástrojů pro automatické zpracování a interpretaci výsledků. Software <a href="https://lcms.cz/products/176">Agilent MassHunter BioConfirm 12</a> umožňuje analýzu dat pro potvrzení hmoty cílového oligonukleotidu a stanovení souvisejících nečistot (Target Plus Impurities, TPI). Tento postup využívá MS dat bez fragmentace, která lze měřit na jednoduchém <a href="https://lcms.cz/products/174">TOF MS detektoru Agilent 6230B</a>. Obrázek níže znázorňuje tento postup. Na dalším obrázku níže je ilustrace zobrazení výsledků této analýzy v software BioConfirm. Podrobnosti naleznete v aplikační poznámce ⁷.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Altium_Analyza_a_purifikace_syntetickych_oligonukleotidu_od_zacatku_do_konce_Od_vyzkumu_a_vyvoje_po_produkcni_QA_QC_Target_Plus_Impurities_TPI_analyticky_postup_v_Mass_Hunter_Bio_Confirm_12_0_72f2a234a3/Altium:-Analyza-a-purifikace-syntetickych-oligonukleotidu-od-zacatku-do-konce.-Od-vyzkumu-a-vyvoje-po-produkcni-QA-QC_Target-Plus-Impurities-(TPI)-analyticky-postup-v-MassHunter-BioConfirm-12.0.jpg" alt="Altium: Target Plus Impurities (TPI) analytický postup v MassHunter BioConfirm 12.0"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Altium_Analyza_a_purifikace_syntetickych_oligonukleotidu_od_zacatku_do_konce_Od_vyzkumu_a_vyvoje_po_produkcni_QA_QC_Zobrazeni_vysledku_Target_Plus_Impurities_TPI_analytickeho_postupu_v_Mass_Hunter_Bio_Confirm_12_0_f13281ed57/Altium:-Analyza-a-purifikace-syntetickych-oligonukleotidu-od-zacatku-do-konce.-Od-vyzkumu-a-vyvoje-po-produkcni-QA-QC_Zobrazeni-vysledku-Target-Plus-Impurities-(TPI)-analytickeho-postupu-v-MassHunter-BioConfirm-12.0.jpg" alt="Altium: Zobrazení výsledků Target Plus Impurities (TPI) analytického postupu v MassHunter BioConfirm 12.0"/>
<h3>Konfirmace sekvence oligonukleotidu</h3>
Pro konfirmaci sekvence oligonukleotidu se pro cílový oligonukleotid změří MS/MS data s vysokým rozlišením a přesnou hmotou systémem LC/QTOF MS. Software MassHunter BioConfirm 12 potom „namapuje“ tato MS/MS data na předpokládané fragmenty vypočtené z uživatelem zadané sekvence nukleotidů a odpoví na otázku, jak dobře se shoduje skutečná sekvence s tou předpokládanou (pokrytí sekvence, sequence coverage). To je možné díky tomu, že z oligonukleotidové sekvence mohou vznikat pouze určité typy fragmentů – viz Obrázek níže. Software BioConfirm vypočte sumární vzorce všech předpokládaných fragmentů z dané sekvence, tyto fragmenty potom cíleně hledá v MS/MS spektru a zobrazí jejich detekci na tzv. Fragment confirmation ladder - viz další obrázek níže. Na základě toho je kvantifikováno pokrytí sekvence (viz následující obrázek níže) a jsou zjištěny strukturní modifikace sekvence i v situaci, že celková molekulová hmotnost je identická. Postup pro konfirmaci sekvence oligonukleotidu naleznete na schematu v Obrázku níže. Podrobnosti naleznete v aplikační poznámce⁸.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Altium_Analyza_a_purifikace_syntetickych_oligonukleotidu_A_Nomenklatura_fragmentace_oligonukleotidu_B_Anotace_oligonukleotidu_8bbca73253/Altium:-Analyza-a-purifikace-syntetickych-oligonukleotidu_A" alt="Altium: A) Nomenklatura fragmentace oligonukleotidů. B) Anotace oligonukleotidů (Fragment confirmation ladder). Barvy písmen reprezentují různé typy fragmentů identifikované a označené v MS/MS spektru"/>-Nomenklatura-fragmentace-oligonukleotidu-B)-Anotace-oligonukleotidu.jpg)
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Altium_Analyza_a_purifikace_syntetickych_oligonukleotidu_od_zacatku_do_konce_Od_vyzkumu_a_vyvoje_po_produkcni_QA_QC_Priklad_LC_MS_MS_spektra_20_meru_and_21_meru_RNA_se_zobrazenim_nalezenych_typu_fragmentu_0807f168d2/Altium:-Analyza-a-purifikace-syntetickych-oligonukleotidu-od-zacatku-do-konce.-Od-vyzkumu-a-vyvoje-po-produkcni-QA-QC_Priklad-LC-MS-MS-spektra-20-meru-and-21-meru-RNA-se-zobrazenim-nalezenych-typu-fragmentu.jpg" alt="Altium: Příklad LC/MS/MS spektra 20-meru and 21-meru RNA se zobrazením nalezených typů fragmentů"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Altium_Analyza_a_purifikace_syntetickych_oligonukleotidu_od_zacatku_do_konce_Od_vyzkumu_a_vyvoje_po_produkcni_QA_QC_Analyticky_postup_pro_konfirmaci_sekvence_v_Mass_Hunter_Bio_Confirm_12_0_ea407766b2/Altium:-Analyza-a-purifikace-syntetickych-oligonukleotidu-od-zacatku-do-konce.-Od-vyzkumu-a-vyvoje-po-produkcni-QA-QC_Analyticky-postup-pro-konfirmaci-sekvence-v-MassHunter-BioConfirm-12.0.jpg" alt="Altium: Analytický postup pro konfirmaci sekvence v MassHunter BioConfirm 12.0"/>
<h3>Purifikace oligonukleotidů</h3>
Kromě portfolia pro analýzu oligonukleotidů nabízí Agilent také celé řešení pro jejich purifikaci. Uživatel může volit purifikační systém v širokém rozsahu od analytického měřítka až po preparativní. Kromě samotné instrumentace jsou k dispozici také kolony, software a hotové metody ⁹ˉ¹¹. Preparativní systémy jsou samozřejmě v bioinertním nebo biokompatibilním provedení jako <a href="https://lcms.cz/products/466">Agilent 1260 Infinity II Bio-Inert</a> nebo <a href="https://lcms.cz/products/468">1290 Infinity II Bio LC</a>.
[1] CRISPR je nedávno objevená technika genetického inženýrství, kterou lze modifikovat genomy živých organismů. Do buňky se dodá nukleasa Cas9 spojená se syntetickou vodicí RNA (gRNA) a genom buňky je možné štěpit na požadovaném místě.

Analýza a purifikace syntetických oligonukleotidů od začátku do konce. Od výzkumu a vývoje po produkční QA/QC

<h3>Diferenciální diagnostika neuroendokrinních tumorů</h3>
Plazmatické metanefriny, metanefrin a normetanefrin, jsou 3-O-methylované metabolity katecholaminů, které zaujímají důležité místo v diferenciální diagnostice neuroendokrinních onemocnění. Neuroendokrinní nádory představují různorodou skupinu onemocnění s různou klinickou symptomatologií a etiopatogenezí a jejich včasná diagnostika je zcela zásadní pro léčbu a chirurgickou intervenci. Postup při diagnóze neuroendokrinních nádorů je založen na několika aspektech - na klinické symptomatologii, na laboratorní diagnostice a na zobrazovacích technikách.
Neuroendokrinní nádory, které pocházejí z chromafinní tkáně sympatického nebo parasympatického nervového systému, jako jsou feochromocytom nebo paragangliom, vykazují setrvalou nebo paroxyzmální nadměrnou produkci katecholaminů. Laboratorní průkaz nadprodukce katecholaminů tumorem je limitován řadou faktorů jako např. nespecifické zvýšení hodnot v důsledku sekundárního stresování při odběru, nedodržením dietního opatření či zkreslením výsledků přítomností němých feochromocytomů.
Důležitým aspektem pro laboratorní diagnostiku je plynulá a nezávislá produkce metanefrinů nádorovými buňkami. Metanefrin a normetanefrin jsou preferovány pro diferenciální diagnostiku feochromocytomu vzhledem k jejich vysoké diagnostické senzitivitě a specificitě.
V laboratorní diagnostice je pro stanovení volných plazmatických metanefrinů využíváno několik metod. Často se používají metody klasické kapalinové chromatografie s následnou spektrofotometrickou, fluorimetrickou či elektrochemickou detekcí. Tyto metody však vyžadují poměrně náročnou přípravu vzorku a delší chromatografii pro separaci interferujících látek. U metod využívajících plynovou chromatografi i je zase nutná derivatizace analytů pro převedení na jejich těkavou formu. Imunoanalytické metody pro stanovení plazmatických metanefrinů jsou sice jednoduché a rychlé, ovšem jejich výsledky mohou být ovlivněny křížovými reakcemi s dalšími látkami.
<h3>Co nás vedlo k vyvinutí LC-MS/MS metody pro stanovení volných metanefrinů v plazmě?</h3>
V diagnostické laboratoři Spadia a.s. jsme využívali pro kvantitativní stanovení plazmatických metanefrinů IVD kit (in vitro diagnostický kit) na principu ELISA. Později se na trhu objevil IVD kit určený pro HPLC systémy s coulometrickou detekcí, který však vyžadoval poměrně složitou implementaci do rutinního provozu. Proto jsme se rozhodli porovnat ELISA a HPLC metodiky pro stanovení plazmatických metanefrinů pro potřeby privátní laboratoře. Testování odhalilo významné rozdíly v kvantitativních výsledcích obou metod (viz Obrázek 1).
Toto zjištění nás vedlo k rozhodnutí zavést metodu založenou na chromatografickém přístupu. Omezením klasické HPLC metody je ovšem náročná příprava vzorků a dlouhý čas analýzy. Příprava série vzorků pro stanovení HPLC trvá okolo 2 hodin, vyžaduje krok extrakce na tuhou fázi (SPE), odpařování elučního činidla a i samotná analýza je časově velmi náročná (doba analýzy jednoho vzorku trvá okolo 50 minut). Nabízelo se však využití LC-MS/MS techniky, která díky vysoké selektivitě a citlivosti umožňuje přípravu vzorku značně zjednodušit a dobu analýzy výrazně zkrátit.
Cílem této práce byl vývoj a implementace rutinní metody stanovení volných metanefrinů v plazmě, která by eliminovala nevýhody klasických chromatografických technik i dříve využívané ELISA metody.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/SPADIA_LAB_Obrazek_1_Graficke_znazorneni_koncentraci_normetanefrinu_graf_vlevo_a_metanefrinu_graf_vpravo_v_plazme_HPLC_a_ELISA_ca4068cd37.jpg" alt="SPADIA LAB: Obrázek 1 - Grafické znázornění koncentrací normetanefrinu (graf vlevo) a metanefrinu (graf vpravo) v plazmě stanovených pomocí IVD kitu pro HPLC s elektrochememickou detekcí a IVD kitu využívajícího ELISA (n = 11)"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/SPADIA_LAB_Obrazek_2_Graficke_znazorneni_koncentraci_normetanefrinu_graf_vlevo_a_metanefrinu_graf_vpravo_v_plazme_HPLC_a_LC_MS_MS_1ad52ad28c.jpg" alt="SPADIA LAB: Obrázek 2 - Grafické znázornění koncentrací normetanefrinu (graf vlevo) a metanefrinu (graf vpravo) v plazmě stanovených pomocí IVD kitu pro HPLC s elektrochememickou detekcí a vyvinuté LC-MS/MS metody (n = 24)"/>
<h3>Vývoj a implementace LC-MS/MS metody pro stanovení volných metanefrinů v plazmě</h3>
<h5>Příprava vzorků</h5>
Vyšetření se provádí ze vzorku plazmy odebrané do odběrové soupravy s antikoagulačním činidlem EDTA. Po odběru je nutné krev centrifugovat 10 min při 4000 g a získanou plazmu do okamžiku provedení analýzy uchovávat při -20 °C.
Příprava vzorku k analýze je nenáročná a nevyžaduje extrakci na pevné fázi (SPE). Ke vzorku jsou přidány deuterované standardy obou analytů, poté je provedena precipitace proteinů isopropanolem, odpaření pod proudem dusíku a rekonstituce ve 100 μl mobilní fáze.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/SPADIA_LAB_Vyvoj_a_implementace_LC_MS_MS_metody_pro_stanoveni_volnych_metanefrinu_v_plazme_fea8e5e192.jpg" alt="SPADIA LAB: Vývoj a implementace LC-MS/MS metody pro stanovení volných metanefrinů v plazmě"/>
<h5>LC-MS/MS metoda</h5>
Separace plazmatických metanefrinů probíhá na UHPLC systému Agilent 1290 Infinity, na koloně SeQuant®ZIC®HILIC HPLC 3,5 μm; 100 × 2,1 mm (Merck, Německo) a analyty jsou separovány gradientovou elucí mobilních fází skládající se z 50 mM vodného roztoku mravenčanu amonného a acetonitrilu při průtoku 0,3 ml/min a teplotě 45 °C. Analyty jsou detekovány na hmotnostním spektrometru Agilent 6490 Triple Quadrupole (parametry iontového zdroje a MRM přechody jsou uvedeny v tabulkách 1 a 2). Celková doba analýzy je 6 min a retenční časy separovaných analytů jsou 2,4 min pro MN a 2,6 min pro NMN (Obrázek 3a, 3b).
<h5>Tabulka 1: Parametry LC-MS/MS iontového zdroje</h5>
<ul>
<li>Agilent Jet Stream ESI: pozitivní mód</li>
<li>Teplota sušícího plynu: 135 °C</li>
<li>Průtok sušícího plynu: 12 l/min</li>
<li>Nebulizer: 45 psi</li>
<li>Teplota fokusačního plynu: 400 °C</li>
<li>Průtok fokusačního plynu: 10 l/min</li>
<li>Napětí ESI: 4000 V</li>
<li>Napětí trysky (Nozzle): 0 V</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/SPADIA_LAB_Tabulka_2_Tabulka_MRM_prechodu_7a9f81645e.jpg" alt="SPADIA LAB: Tabulka 2 - Tabulka MRM přechodů"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/SPADIA_LAB_Obrazek_3a_Stanoveni_volnych_metanefrinu_v_plazme_pomoci_LC_MS_MS_metody_chromatogram_kontrolniho_vzorku_bf7a3a5cd1.jpg" alt="SPADIA LAB: Obrázek 3a - Stanovení volných metanefrinů v plazmě pomocí LC-MS/MS metody, chromatogram kontrolního vzorku"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/SPADIA_LAB_Obrazek_3b_Stanoveni_volnych_metanefrinu_v_plazme_pomoci_LC_MS_MS_metody_chromatogram_pacientskeho_vzorku_0e591172f6.jpg" alt="SPADIA LAB: Obrázek 3b - Stanovení volných metanefrinů v plazmě pomocí LC-MS/MS metody, chromatogram pacientského vzorku"/>
<h5>Porovnání vyvinuté LC-MS/MS metody s kitem pro HPLC</h5>
Vyvinutá metoda byla testována na pacientských vzorcích a data byla porovnána s daty získanými z kitu pro HPLC. Z Obrázku 2 je patrné, že LC-MS/MS metoda poskytovala obdobné výsledky jako HPLC metoda s coulometrickou detekcí. Z pohledu náročnosti na přípravu vzorků a délky chromatografické separace však představuje LC-MS/MS metoda významnou úsporu času a nákladů na analýzu.
Rozsah kalibrace vyvinuté metody pro metanefrin je 0,035 – 7,175 nmol/l (Obrázek 4) s limitem kvantifikace 0,035 nmol/l (CV = 4,8 %) a rozsah kalibrace pro normetanefrin je 0,049 – 9,956 nmol/l (Obrázek 5) s limitem kvantifikace 0,049 nmol/l (CV = 6,7 %). Výtěžnost, určená metodou standardního přídavku se pohybovala v rozmezí 89 – 98 %. Variační koeficienty (CV) preciznosti v sérii a mezilehlé preciznosti se pohybovaly pod 10 % (viz Tabulka 3). 
Pro určení mezilehlé preciznosti byly použity dvě hladiny kontrolních materiálů ClinChek® for Metanephrines.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/SPADIA_LAB_Tabulka_3_Preciznost_v_serii_a_mezilehla_preciznost_e9b22d853a.jpg" alt="SPADIA LAB: Tabulka 3 - Preciznost v sérii a mezilehlá preciznost"/>
<h3>Závěrem</h3>
Prezentovaná LC-MS/MS metoda poskytuje vyhovující analytické parametry pro oba analyty. Srovnání výsledků s HPLC metodou potvrdilo vhodnost použití tohoto postupu pro stanovení volných metanefrinů v plazmě v rutinní diagnostické laboratoři. Zavedením LC-MS/MS metody do rutinního provozu laboratoře byla významně zjednodušena příprava vzorku a zkrácen čas analýzy z 50 min na 6 min.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/SPADIA_LAB_Obrazek_4_Kalibracni_krivka_pro_metanefrin_v_plazme_75503363fc.jpg" alt="SPADIA LAB: Obrázek 4 - Kalibrační křivka pro metanefrin v plazmě"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/SPADIA_LAB_Obrazek_5_Kalibracni_krivka_pro_normetanefrin_v_plazme_8ae8016471.jpg" alt="SPADIA LAB: Obrázek 5 - Kalibrační křivka pro normetanefrin v plazmě"/>

Stanovení volných plazmatických metanefrinů pomocí kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní detekcí

<a href="https://lcms.cz/products/165">Agilent 6545XT</a> zahrnuje technické inovace, navržené specificky pro analýzu vellkých molekul. Disponuje hmotnostním rozsahem až 30,000 Da, vysokou citlivostí a vylepšenou přesností hmoty a rozlišením pro velké molekuly. SWARM algoritmus umožňuje automatické ladění s nalezením optima průchodu iontů pro intaktní proteiny. Takto získaná kvalitní data jsou navíc zpracována algoritmy, které zachovávají jemný detail a je tak možné získat informace o izoformách na koncentračních hladinách na nízkých ppm hladinách.
<h3>Aplikace (15)</h3>
<ul>
<li>Characterization of Viral Vector Particles Using the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF | 2020 | 
</li>
<li>Analysis of Native Intact Protein Complexes Using the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF Mass Spectrometer | 2020 | 
</li>
<li>Analysis of Native Intact Protein Complexes Using the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF Mass Spectrometer | 2020 |
</li>
<li>An Integrated Workflow for Sensitive Intact Protein Quantitation of Monoclonal Antibodies from Biological Matrix | 2019 | 
</li>
<li>Sensitive Native Mass Spectrometry of Macromolecules Using Standard Flow LC/MS | 2020 |
</li>
<li>In-depth Peptide Mapping with Iterative MS/MS Acquisition on the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q‑TOF | 2020 |
</li>
<li>Robust and Reliable Peptide Mapping - The Agilent 1290 Infinity II Bio LC System as the new platform for UV and MS-based primary structure and PTMs analysis of mAbs | 2020 | 
</li>
<li>Glycopeptide Characterization for Various Monoclonal Antibodies Using the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF | 2019 |
</li>
<li>Mass Spectrometric Characterization of Antibody-siRNA Conjugates using the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q‑TOF | 2020 |
</li>
<li>LC/MS/MS Peptide Mapping Comparison of Innovator and Biosimilars of Rituximab | 2019 |
</li>
<li>An Improved Workflow for Profiling and Quantitation of Sialic Acids in Biotherapeutics | 2020 |
</li>
<li>A streamlined drug-to-antibody ratio determination workflow for intact and deglycosylated antibody-drug conjugates | 2019 |
</li>
<li>Streamlined Workflows for N-Glycan Analysis of Biotherapeutics Using Agilent AdvanceBio Gly-X InstantPC and 2-AB Express Sample Preparation with LC/FLD/MS | 2019 |
</li>
<li>A Comparative Study of the Intact Mass, Subunit Mass, and Released Glycans of Two Rituximab Biosimilars Using High-Resolution LC/MS | 2020 |
</li>
<li>Analysis of a Synthetic Peptide and Its Impurities | 2020 |
</li>
</ul>
<h3>Webináře 2021 (2)</h3>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/webinar/631">Ultra-Sensitive Intact Monoclonal Antibody Quantification Using a Liquid Handling Platform and a LC/Q-TOF Mass Spectrometer</a> | St, 6.1.2021, 19:00 (CET - Prague) |
</li>
<li><a href="https://lcms.cz/webinar/632">Characterization of Viral Vector Particles Using the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF</a> | St, 13.1.2021, 19:00 (CET - Prague) |
</li>
</ul>

Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF - Analýza intaktních proteinů - Aplikace/Webináře 2019-2020

Webináře

Aplikace

Akademie

Osobnosti

Plasty

Životní prostředí

Potraviny

Vody

Zdraví

Přednáška

Vědecký článek

Rozhovor

Toxikologie

Popularizace

Věda a výzkum

Software

Covid-19

Kariéra

Článek

Laboratoře

Různé

Produkt

Video

Poster

Nejbližší akce

Typ novinky

Zaměření

Je autorizovaným distributorem společnosti Agilent Technologies pro Českou republiku v oblastech chromatografie (GC, HPLC, UHPLC, kapilární elektroforéza) a hmotnostní spektrometrie (GC/MS, LC/MS, CE/MS), disolučních aparátů, molekulární (UV-Vis, UV-Vis-NIR, fluorescence, FTIR analyzátory a mikroskopy) a atomové spektroskopie (ICP-OES, ICP-MS, AAS), a v neposlední řadě také v oblasti molekulární biologie a genomiky (analýza nukleových kyselin a proteinů, microarray skenery a skla, PCR & RT-PCR, qPCR, řešení pro NGS, reagencie pro mutagenezi a klonování, sondy FISH a další).

Altium International

SPADIA LAB je síť moderních diagnostických laboratoří, která patří k největším poskytovatelům laboratorní medicíny v České republice. Provádíme široké spektrum rutinních, vysoce specializovaných i unikátních vyšetření. Jsme správnou volbou pro všechny lékaře, kteří chtějí poskytovat kvalitní nejen primární zdravotní péči, ale i léčbu ve fakultních nemocnicích. 

LCMS novinky typu aplikace - strana 1

Stanovení volných plazmatických metanefrinů pomocí kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní detekcí

Analýza a purifikace syntetických oligonukleotidů od začátku do konce. Od výzkumu a vývoje po produkční QA/QC

Přehled HPLC a LC/MS aplikací Agilent Technologies 01-05/2023

Přehled HPLC a LC/MS aplikací od Agilent Technologies H1/2022

Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF - Analýza intaktních proteinů - Aplikace/Webináře 2019-2020

Nejbližší akce

LABORATORNÍ MEDICÍNA - ŽERMANICE 2026

Setkání uživatelů Shimadzu 2026

Advances in Chromatography and Electrophoresis & Chiranal 2026

Webináře

Biopharma fundamentals: Fragment analysis by CE

Proteome Discoverer 3.3 SP1: Processing DIA data with DIA-NN node

Improving RNA Purity and Measurement for Reliable Bioprocessing